仪器分析第七章分子发光.pptVIP

分子荧光、磷光光谱仪又称光度计，主要组成为：01光源、单色器（滤光片或光栅）、液槽、检测器、信号处理与显示系统。02荧光光度计037.4分子荧光、磷光光谱仪光源第一单色器试样池第二单色器检测器放大显示系统第一单色器又叫激发单色器第二单色器又叫发射单色器激发光谱和荧光光谱(发射光谱)的获得激发光谱的获得任何荧光物质都具有两个特征光谱，即激发光谱和荧光光谱。固定第二单色器的波长范围，让激发光源经第一单色器进行分光（波长扫描），测定在不同激发光波长下物质的荧光强度，记录IF—λex的变化，即可获得物质的激发光谱。荧光光谱的获得固定激发光的波长和强度，而让物质发出的荧光通过第二单色器测定不同波长的荧光强度，以荧光的波长（λem）为横坐标，荧光强度（IF）为纵坐标，即可获得物质的荧光光谱。例如蒽和硫酸喹啉的激发光谱和荧光光谱蒽的激发光谱和荧光光谱硫酸喹啉的激发光谱和荧光光谱第七章分子发光—荧光、磷光01和化学发光02学习目的03通过本章学习，明确分子发光研究的对象，了解分子发光产生的机理，理解分子发光的影响因素。掌握分子发光的一些基本概论，基本仪器结构及定量分析法。0420171分子荧光、磷光光谱法0120182分子荧光、磷光和化学结构的关系0220193影响光致发光的因素0320204分子荧光、磷光光谱仪0420215分子荧光、磷光光谱的应用0520226化学发光光谱法简介06本章主要内容7.1分子荧光、磷光光谱法一、分子荧光、磷光光谱法概述分子发光①荧光fluorescence②磷光phosphorescence③化学发光chemiluminescence→光致发光光致发光可表示为：MM*化学发光可表示为：A+BC+D*hν无辐射跃迁123654hνIpIf分子荧光光度法、磷光光度法和化学发光法主要用于定量分析，灵敏度高，线性范围宽，用于测定痕量的无机物和有机物，一般可达ng·mL-1。但是，由于方法的高灵敏度，基体干扰严重。因此，发光法可作为液相色谱和毛细管电泳的检测器。和吸收光谱相比，分子发光除了在定量分析方面应用外，还在许多领域得到应用。总的来说，分子发光法的应用不如分子吸收光谱法，主要是能产生发光的物质较少。123分子荧光、磷光的产生分子的单重态和三重态根据保里原理，处于分子同一轨道的两个电子自旋方向相反，自旋量子数I分别为+1/2和-1/2，其代数和S=0（总自旋量子数）。自旋多重性2S+1=1，称单重态，用S（singlet）表示。大多数具有偶数电子的分子（氧分子例外）在室温下都处于单重基态S0，若受能量作用被激发，电子在跃迁过程中自旋方向保持不变为激发单重态。若电子跃迁过程中自旋方向发生改变，自旋多重性2S+1=3称为激发三重态，用T（triplet）表示。三重态又称亚稳态。第一激发态用S1或T1表示，以后类推。A由洪特规则，ES1ET1B单重态分子具有抗磁性，三重态分子具有顺磁性。C荧光、磷光的产生在室温下，大多数分子均处于基态的最低振动能级，当分子吸收特征辐射后可以跃迁至S1或S2中各个不同振动和转动能级产生吸收，通过无辐射跃迁，它们急剧（10-15s）降落到第一激发单重态的最低振动能级后再回到基态的各个振动能级时，以光的形式驰豫，所发出的光称为荧光（寿命为10-5～10-8s）。S1→S0属允许跃迁。因此，荧光光谱的形状和激发光的波长无关。处于三重态分子的能量低于相应单重态分子，但通常第一激发三重态的一个振动能级几乎与第一激发单重态的最低振动能级的能量相同，因此，由第一激发单重态的最低振动能级有可能通过系间窜跃至第一激发三重态，在经过振动弛豫回到激发三重态的最低振动能级，然后以光的形式弛豫回到基态，发射磷光（寿命10-4～10s或更长）。T1→S0属禁阻跃迁，速度慢。∴激发光一旦停止，则荧光立即停止，而磷光还可持续一段时间。12某些分子在跃迁至T1后，通过热激活有可能再回到S1的各个振动能级，然后再由S1的最低振动能级弛豫回基态而发射荧光，此称延迟荧光。以上荧光、磷光产生过程可用Jablonski图来说明。7.2分子荧光、磷光和化学结构的关系一、荧光量子产率（量子产率或荧光效率）φ===发射荧光的分子数激发分子总数发射光量子数吸收光量子数kfkf+∑ki01020304kf—荧光发射过程的速率常数。其大小主要取决于化学结构；荧光、磷光与有机化合物结