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其身正,不令而行;其身不正,虽令不从。——《论语》
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PCR法检测HBV
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君子忧道不忧贫。——孔丘
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摘要:目的了解乙型肝炎病毒的相关知识及PCR技术在乙型肝炎病毒检测方面的应用,
并通过实验的方法加深理解。方法将已导入乙肝病毒特定段基因的质粒用基因扩增仪进行
扩增,然后分两组进行电泳,并设置阴性对照、阳性对照、空白对照和Marker对照组。电
泳完毕后将胶板放在UVP凝胶成像系统下观察,对照。结果实验组1弱阳性,实验组2
阴性。讨论分析了实验结果及误差产生的可能原因。
关键词:HBVPCR琼脂糖凝胶电泳
一、引言
1.现状
乙型肝炎病毒感染是一个全球性的公共卫生问题。据估计,全
世界大约有20亿人是过去或现在的HBV感染者以及超过350万人长
期感染乙肝病毒。在受感染的青少年或成人中,5%-10%将发
展成慢性携带者,而在受感染的新生儿达90%慢性化发展。在慢性
HBV感染者中,70%-80%可以持续正常多年或终身。进一步持
续病毒感染,可以导致慢性活动性肝炎,甚至可能发展至肝硬化和
[1]
肝癌。在我国,乙肝病毒携带者约有1.2亿人。
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君子忧道不忧贫。——孔丘
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2.HBV的形态与结构[2]
感染者血清中用电镜观察可见三种不同形态的HBV颗粒,即大
球形颗粒、小球形颗粒和管形颗粒。
大球形颗粒亦称Dane颗粒,是具有感染型的完整成熟的HBV,
呈球形。病毒外层有7nm厚的包膜,内层为病毒核心(核衣壳)结
构,成二十面体立体对称。HBV核心内部含有双股不完全环状的DNA
基因组和DNA多聚酶。小球形颗粒,主要为HbsAg,不含HBVDNA
和DNA多聚酶,无感染性。管形颗粒,是由小球形颗粒“串联”而
成,不含病毒核酸,无传染性。
3.HBV基因结构及抗原组成[3]
HBV-DNA分为负链(长链)及正链(短链),其中负链有4个开放
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百川东到海,何时复西归?少壮不努力,老大徒伤悲。——汉乐府
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阅读框架,分别称为S、C、P和X基因区,他们彼此间相互重叠,
以不同的启动子编码多种蛋白。
⑴S基因区:S区基因有3个不同的启动子,分别形成S基因、PreS1
基因与PreS2基因,分别编码HbsAg、PreS1Ag和PreS2Ag三种包膜
蛋白多肽;
⑵C基因区:由前C基因和C基因组成,分别编码HBeAg及HBcAg;
⑶P基因区:P区基因最长,编码HBV-DNA多聚酶、反转录酶及RNA
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