2025年高二生物寒假衔接讲练（人教版）第08讲 基因工程的基本操作程序（原卷版）.pdfVIP

第08讲基因工程的基本操作程序

【学习目标】

【基础知识】

一、目的基因的筛选和获取

1.筛选合适的目的基因：从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选是较为有效的方法之一，如Bt

基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因。

2.利用PCR获取和扩增目的基因

（1）获取目的基因的方法a.人工合成（基因碱基序列是已知的）

b.PCR技术扩增（已知基因两侧的碱基序列）

c.从基因文库中获取（原核生物）

（2）PCR技术

PCR的含义：是聚合酶链式反应的缩写，它是一项根据DNA半保留复制的原理在体外提供参与DNA复制

的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。

基本条件场所：需要在一定的缓冲溶液中进行，其中一般要添加Mg2+

模板：已知两侧碱基序列的DNA母链

原料：4种脱氧核苷酸

酶：耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）

引物：是2种与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸

反应过程变性：加热超过90℃，双链DNA解旋为单链

复性：温度下降至50℃左右，两种引物与互补单链DNA结合

延伸：温度上升到72℃左右，四种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶作用下合成子链DNA

n

结果：两引物间固定长度的DNA序列呈指数扩增（即2）

鉴定PCR产物：用琼脂糖凝胶电泳来鉴定

n

注：1.含脱氧核苷酸链等长的DNA分子数为2-2n

2.第三轮出现两条链等长的DNA片段

3.两种引物之间需要满足的是：不能碱基互补配对，是防止引物之间结合形成双链，降低引物与DNA

模板链结合的效率。

归纳总结

1、苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白）为什么对人畜无害的原因：

Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞

也没有特异性受体，不能穿透细胞膜杀死细胞。

2、基因文库的概念：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌

分别含有这种生物的不同基因，成为基因文库。

3、cDNA概念：以mRNA为模板进行逆转录形成的DNA

6、cDNA文库和基因组文库的比较：

文库类型cDNA文库基因组文库

文库大小小大

基因中启动子无有

基因中内含子无有

基因多少某种基因的部分基因某种生物的全部基因

7、获取目的基因的三种方法：①人工合成获取；②从基因文库获取；③通过PCR技术获取

8、PCR技术：聚合酶链式反应的缩写，是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制

的各种组分和反应条件，对目的基因的核苷酸进行大量复制的技术。

9、引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。①体内复制的引物为RNA单链；

②体外复制的引物一般为DNA单链

10、PCR反应的条件：需要在一定的缓冲溶液中进行，需提供模板、引物、脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚

合酶（Taq酶）；同时需要控制温度

2+

11、运用PCR技术时，缓冲液中需要加入一定的Mg，激活DNA聚合酶

10、DNA体内复制的条件：

11、DNA体外复制（PCR）的条件

12、PCR扩增的过程：

名称具体内容

变性目的基因D