实验三基因的PCR扩增技术.pptVIP

下载本文档

0
0
约1.37千字
约 15页
2025-01-16 发布于上海
举报
版权申诉

实验三基因的PCR扩增技术.ppt

1、本文档共15页，可阅读全部内容。
2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

实验三基因的PCR扩增技术一、实验目的学习PCR反应的基本原理与实验技术从BCG基因组DNA中PCR扩增Rv1791（PE19）基因二、基本原理PCR类似于DNA的天然复制过程。将待扩增的DNA片段与其两侧互补的两段寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增倍数可达2n倍。体内DNA的复制DNA聚合酶dNTP解旋酶类引物5’3’加热变性复性复温DNA的变性和复性加热或强酸、碱性作用可以使DNA双螺旋的氢键断裂,双链解离,形成单链DNA,这称为DNA的变性。解除变性的条件后,变性的单链可以重新结合起来,形成双链,其原有的特性和活性可以恢复,这称DNA复性,也叫退火。PCR扩增原理引物延伸延伸5’5’3’3’变性、退火变性、退火1反应体系总体积25-100?lBuffer缓冲液dNTP原料Primer引物DNA分子模板Taq酶DNA聚合酶三、实验材料BCG基因组DNA10?PCR反应缓冲液、4?dNTPs、TaqDNA聚合酶、模板DNA、引物（P1、P2）、超纯水SWPCR反应管、移液器、PCR仪、离心机引物设计准备PCR反应溶液PCR扩增反应结果检测四、实验步骤Rv1791-F：ATGAATTCAGGAAGACAGCATGTCGTTC（EcoRI）Rv1791-R：ATCTCGAGTGTTCCCCCTCTCCTTCAG（XhoI）（二）准备PCR反应溶液10×PCR反应缓冲液2.5μl4×dNTPs2.0μl引物P11μl（10nM）引物P21μl模板DNA2μlTaqDNA聚合酶0.2μl用无菌去离子水至25μl↓用手指轻弹PCR反应管管底部，使溶液混匀↓在台式离心机中离心2秒以集中溶液于管底在PCR仪中设计如下反应程序：94?C、5min；94?C、30sec，61?C、40sec，72?C、30sec，30个循环；72?C、5min进行反应。反应完毕，将样品取出置于冰浴中待用将已混匀的PCR反应管置于PCR仪的反应孔中，盖好盖子（三）PCR扩增反应