微生物发酵产酶.ppt

培养基的设计原则1、选择适宜的营养物质2、营养物的浓度及配比合适3、物理、化学条件适宜4、经济节约5、精心设计、试验比较培养不同的微生物必须采用不同的培养条件；培养目的不同，原料的选择和配比不同；不同阶段，培养条件也有所差异。01实验室的常用培养基：02细菌：牛肉膏蛋白胨培养基（或简称普通肉汤培养基）；03放线菌：高氏1号合成培养基培养；04酵母菌：麦芽汁培养基；05霉菌：查氏合成培养基；06例如枯草芽孢杆菌：07一般培养：肉汤培养基或LB培养基；08自然转化：基础培养基；09观察芽孢：生孢子培养基；10产蛋白酶：以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培养基；1五大要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、水2培养基几乎是一切对微生物进行研究和利用工作的基础。3培养基（medium）是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。4任何培养基都应该具备微生物生长所需要五大营养要素。构成细胞物质或代谢产物中碳架碳源可作能源，为生命活动提供能量常用碳源：糖类、醇类、脂类、有机酸、烃类、蛋白质及其降解物异养微生物：糖类是最好碳源（葡萄糖最为通用）水是微生物最基本的组成分（７０％—９０％）水是微生物体内和体外的溶剂（吸收营养成分和代谢废物）水是细胞质组分，直接参与各种代谢活动调节细胞温度和保持环境温度的稳定（比热高，传热快）水碳源选择合适碳源，以适应目的酶的合成调节机制构成细胞物质和代谢产物中氮素（不能用作能源）氮源有机氮源蛋白胨、酵母膏、牛肉膏无机氮源铵盐、硝酸盐参与酶的组成、构成酶活性基、激活酶活性维持细胞结构的稳定性调节细胞渗透压控制细胞的氧化还原电位有时可作某些微生物生长的能源物质常用：硫酸盐、磷酸盐、氯化物以及含有钾、钠、钙、镁、铁等元素的化合物。氮源无机盐需要注意合适的碳氮比生长因子是指某些微生物不能用普通的碳源、氮源物质进行合成，而必须另外加入少量的生长需求的有机物质。分类：化学结构分成维生素、氨基酸、嘌呤（或嘧啶）及其衍生物和类脂成分等四类功能：以辅酶与辅基的形式参与代谢中的酶促反应实验室中常用酵母膏、蛋白胨、牛肉膏等作为各种生长因子的的需要，麦芽汁、米曲汁等天然培养基中本身含有各种生长因子生长因子培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。为了维持培养基pH的相对恒定，通常在培养基中加入pH缓冲剂，或在进行工业发酵时补加酸、碱。（1）pH值的控制通常培养条件：细菌与放线菌：中性或碱性范围（pH6.5～8.0）酵母菌和霉菌：偏酸性(pH4～6)植物细胞生长的最适pH值为5～62、发酵条件的控制在发酵过程中，微生物不断进行着各种代谢反应，代谢产物能直接影响着pH值。培养基成分中C/N比高，发酵液倾向于酸性；C/N比低，发酵液倾向于碱性。通气量的影响：通气量足，糖、脂类物质能完全氧化，最后产物为CO2和H2O；通气量不足，糖、脂类物质氧化不完全，则会生产中间产物有机酸。盐利用的影响：强酸类盐的利用会引起pH值下降，强碱类盐的利用会引起pH值的上升。碳源不足时，也会因利用氨基酸的碳架而引起pH值的变化。3214pH值对产酶的影响发酵液pH高用糖或淀粉调节，过低通过氮调节。04调节通风量，使氧化还原电位保持一定的值；03添加缓冲液，保持pH一定范围；02调节培养基的原始pH，保持一定的C/N比；01调节pH的方法：细胞发酵产酶的最适pH值与生长最适pH值往往有所不同。细胞生产某种酶的最适pH值通常接近于该酶催化反应的最适pH值。1有些细胞可以同时产生若干种酶，在生产过程中，通过控制培养基的pH值，往往可以改变各种酶之间的产量比例。例如，采用米曲霉发酵生产蛋白酶时，当培养基的pH值为碱性时，主要生产碱性蛋白酶；培养基的pH值为中性时，主要生产中性蛋白酶；而在酸性的条件下，则以生产酸性蛋白酶为主。2（2）温度的控制通常在生物学范围内每升高10℃，生长速度就加快一倍，所以温度直接影响酶反应，对于微生物来说，温度直接影响其生长和合成酶。01枯草杆菌的最适生长温度为34～37℃02黑曲霉的最适生长温度为28～32℃03通风及搅拌速度对发酵温度均有影响。代谢反应对温度的影响：发酵过程中，微生物在发育过程中，不断进行合成代谢与分解代谢反应。在发酵初期，合成反应占优势，所以发酵液需要升温。当菌体繁殖旺盛时，分解代谢旺盛会带来大量热量，故发酵液需要降温。1细胞必须获得充足的氧气，使从培养基中获得的能源物质（一般是指各种碳源）经过有氧降解而生成大量的细胞的生