实验二细菌人工培养.ppt

概念:培养基是用人工方法将多种营养物质按照各类微生物生长的需要而合成的一种混合养料。任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水*SS平板的原理:SS为强选择性培养基.其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。如柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用及煌绿共同来抑制肠道非病原性细菌及部分大肠杆菌的生长。对志贺菌属及沙门菌属相对抑制性较弱。可用于志贺菌和沙门菌的分离。麦糠凯琼脂培养基。MAC:一种用于分离鉴定细菌的培养基，大肠杆菌在其上呈红色或粉红色，有的菌落只是中间呈现红色。由于含有胆酸盐，能抑制革兰氏阳性菌生长，有利于大肠杆菌和沙门氏菌的生长。*菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。*临床应用的澄清透明的注射液若发现上述任何一种现象，均表明已被细菌污染，禁止使用。均匀混浊（葡萄球菌）、沉淀（链球菌）和形成菌膜（枯草芽孢杆菌）*实验二细菌的人工培养实验目的了解人工培养基的制作。了解细菌的接种方法分离培养方法——平板划线法（混合菌液）了解细菌的生长现象液体、固体、半固体培养基一、人工培养基的制备和种类1.制备原则2.制备程序3.常用培养基的分类1.制备原则（1）适当的营养成分；（2）合适的酸碱度；（3）配制后经灭菌使之无菌，方可应用。2.制备程序配料→熔化→测定及矫正PH→分装→灭菌→备用配制方法（1）称量分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。（2）溶化加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。（3）调pH用1mol/LNaOH溶液调pH至7.2。（4）定容将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。（5）加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。（6）分装、加塞、包扎。（7）高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。LB培养基的配制：成分：胰蛋白胨(tryptone)10g、酵母提取物(yeastextract)5g氯化钠(NaCl)10g、固体培养基另加琼脂粉15-20g，加双蒸水至1000mL,用5mol/LNaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min。3.常用培养基的分类按物理状态不同划分固体培养基液体培养基在液体培养基中加入一定量凝固剂，使其成为固体状态，琼脂含量一般为1.5%-2.0%琼脂含量一般为0.3%-0.5%不加任何凝固剂半固体培养基固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定用于增菌，大规模工业生产及在实验室进行微生物的研究3.常用培养基的分类按用途不同划分鉴别培养基特殊培养基如厌氧培养基。用于厌氧菌的培养。含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物。比如肉汤培养基。在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基。如血琼脂培养基。基础培养基利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应不同的原理，鉴别和鉴定细菌。如麦糠凯琼脂培养基。选择培养基在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。如SS琼脂培养基。营养培养基细菌的接种技术分离培养接种法——平板划线法、平行划线法纯种细菌接种法——固体斜面培养基接种法液体培养基接种法半固体培养基接种法无菌操作：在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行接种工具常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等。图－6细菌分离培养接种法的原理01根据机械分离作用，在无菌培养基中从混杂的标本中分离出所需的单个细菌生长繁殖所形成的菌落。02以无菌操作用接种环取待分离纯化的菌液，将菌液点种在平板边缘一处，取出接种环，烧去多余的菌种。将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙（约45度角）伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却,然后从接种有菌的部位在平板上自左向右轻轻划线。划线时平板面与接种环面成30-40度角，以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线,线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖.灼烧接种环。用接种环先将培养物涂布于平板1区并作数次划线,再在2、3……区依次划线。每划完一个区域，均将接种环灭菌一次，待冷后再划下一区域每一区域的划线均接触上一区域的接种线1~2次，使接种量逐渐减少，以获得单个菌落。其他操作与上述