食品生物化学实验教案.docVIP

食品生物化学实验指导

高建华曹劲松宁正祥编

华南理工大学

二OO六年三月

目录

第一局部普通试验

实验一果胶的制备和特性测定

1

一、从果皮中提取果胶

1

二、果酱的制备

1

实验二卵磷脂提取、鉴定及乳化特性试验

2

实验三蛋白质的盐析透析

5

一、蛋白质的盐析

5

二、蛋白质的透析

6

实验四氨基酸纸电泳别离鉴定

7

实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响

9

激活剂、抑制剂对唾液淀粉酶活力的影响

10

二、温度和pH值对а-液化淀粉酶活力的影响

10

实验六果蔬中过氧化物酶活力测定

12

实验七酶催化转氨基反响的纸层析鉴定

14

实验八焦糖的制备极其性质

17

实验九酶促褐变的抑制及叶绿素的性质

19

第二局部综合设计性实验：一、酵母蔗糖酶的别离纯化

实验一活性干酵母蔗糖酶的提取

23

实验二蔗糖酶的分级沉淀提取

25

实验三蔗糖酶的葡聚糖凝胶层析法脱盐

28

实验四离子交换柱层析别离纯化蔗糖酶

30

实验五蔗糖酶的交联葡聚糖凝胶色谱别离纯化

35

实验六聚丙烯酰胺凝胶电泳别离测定蔗糖酶纯度

38

实验七SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量

43

实验八蔗糖酶的酶活特性研究

辅助性实验

45

实验一蔗糖酶活力测定

46

实验二Folin-酚法测定蛋白质含量

48

实验三考马斯亮蓝染料比色法测定蛋白质含量

50

实验四紫外吸收法测定蛋白质浓度

51

附表：调整硫酸铵溶液饱和度计算表

附表10℃下由S1提高到S2时每100mL样品加固体硫酸铵的克数

53

附表2室温下由S1提高到S2时每升加固体硫酸铵的克数

二、天然活性物质植物黄酮的提取及应用

实验一藤茶植物黄酮的提取

实验二重结晶法纯化黄酮提取物

实验三植物黄酮重结晶晶体形态观察

实验四紫外分光光度法测定总黄酮含量

实验五高效液相色谱法测定蛇葡萄属植物黄酮的含量

实验六植物黄酮稳定性试验

实验七植物黄酮在油脂中的抗氧化活性测定

辅助性实验：

实验一油脂过氧化物值的测定

实验二油脂酸价的测定

54

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60

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70

72

实验一果胶的制备和特性测定

一、果胶的制备

目的要求了解果胶的根本结构、果胶的分类及提取原理和方法。

实验原理

果胶物质可分为三类，原果胶、果胶及果胶酸，其根本结构是不同程度甲酯化和被

钠、钾离子中和的α-半乳糖醛酸以1,4-苷键形成的聚合物，分子量高达200000左右。

原果胶不溶于水，主要存在于出生细胞壁中，在一定温度经稀酸长时加热条件下，果皮

层细胞壁的原果胶发生水解，由于结构甲酯化程度降低及局部苷键断裂而转变成水溶性

果胶。

水溶性果胶经脱水干制有利于保藏和运输，果胶干制有直接枯燥法和沉淀脱水两种方

法。直接枯燥通常是把浓缩的果胶水溶液通过喷雾枯燥获得。沉淀脱水那么是根据果胶不溶

于高浓度乙醇特性，采用乙醇沉淀提取。乙醇沉淀提取果胶，控制酒精浓度极为关键，浓

度太高或太低都是不利的，浓度过高等于水分减少，水溶性的非胶物质没有时机溶解在水

中，会随果胶一起沉淀出来，使果胶纯度降低；反之如果乙醇浓度太低，水分含量过高，

果胶沉淀不完全，因此用乙醇沉淀提取果胶，乙醇用量最好为55%—60%左右。果胶溶液

中存在有微量电解质时，参加乙醇果胶将以海绵絮状沉淀析出，反之不易聚集析出。

柑橘类果皮是提取果胶的优良原料，新鲜果皮含果胶约1.5%—3%，干果皮那么含9%-18%，柠檬皮果胶含量更多，新鲜果皮内含2.5%—5.5%，干果皮内含量高达30%—40%。

〔三〕试剂及材料

1、0.5%HCl溶液量取12mL浓盐酸，加水稀释至1000mL。

2、1mol/LNaOH溶液称取40gNaOH，用水溶解并稀释至1000mL。

3、95%乙醇。

4、柑桔皮和柚子皮。

〔四〕操作方法

1、称取50—100g果皮，分切，把果皮放入沸水中煮沸3分钟，而后用清水漂洗，以除

去色素、苦味等非胶物质，并把多余水分除去。

2、把上述处理后的果皮放入600mL烧杯中，参加0.5%HCl200—300mL，一般以浸没

果皮为度，在搅拌条件下保持微沸提取20min。

3、趁热用4层纱布过滤，用少量50℃的热水分次将滤渣洗涤2—3次，合并滤液，冷

却至室温。

4、用1mol/LNaOH调整滤液的PH值至3—4。

5、缓缓向提取液参加95%乙醇约300mL，并略加搅拌，待果胶呈棉絮状