微生物的诱变育种.ppt

2.5诱变剂的处理方式两个以上因子同时处理复合因子处理2.复合因子处理2.5诱变剂的处理方式不同诱变剂交替处理0101020304同一种诱变剂连续重复使用紫外线光复活交替处理诱变剂处理时间与诱变效应的关系0203042.6影响突变率的因素菌种遗传特性与生理状况菌体细胞壁结构环境条件的影响诱变前预培养和诱变后培养温度、pH、氧气等外界条件对诱变效应的影响平皿密度效应第三节突变株的分离与筛选筛选的发展趋势：随机乱向筛选定向筛选1突变是随机不定向的，但是筛选是定向的，培养基和培养条件是决定菌种某些特性保留或淘汰的“筛子”。2筛选根据主次分为初筛和复筛3初筛：以多为主，尽量扩大筛选范围。4复筛：以质和精为主，反复多次，结合自然分离，选育高产或其他优良菌株。53.1诱变育种的基本环节3.2诱变育种的基本环节常规筛选程序3.2诱变育种的基本环节简便筛选程序根据特定代谢产物的特异性，利用琼脂平板进行筛选和活性粗测的方法，大幅度扩大有效筛选量，提高筛选工作效率。几种具体方法平板菌落预筛随机筛选即摇瓶筛选优点：不管种子或发酵过程的生产条件、生理条件如何，都与发酵罐大生产条件相近，可以模拟进行。缺点：在突变率小的情况下，如果菌落挑取少，很难筛选到理想的突变株。3.3分离和筛选3.3分离和筛选A.根据形态筛选变株B.根据平板菌落生化反应筛选变株C.采用冷敏感菌筛选抗生素变株:先低温后高温培养.2.平板菌落预筛2.平板菌落预筛3.3分离和筛选浓度梯度法应用复印技术快速筛选变株3.3分离和筛选F.琼脂块大通量筛选变株优点1：判断活性圈准确所有菌落限制在同面积琼脂块上，避免相互干扰；每个菌落的产物都在相同体积的琼脂块中，避免扩散造成的误差。优点2：大幅度增加筛选量不足：培养条件与发酵条件有较大距离，易漏筛解决办法：制备琼脂块用发酵培养基2.平板菌落预筛3241摇瓶培养通常分为初筛和复筛。摇瓶筛选实际上是各变异株之间的对比试验，有关摇瓶的各种条件要力求一致。初筛时菌株较多，常用锥形瓶或大号试管摇床培养；复筛时一个菌株重复3～5个试验瓶，以提高重演性；必要时还可采用两种以上的培养基进行筛选，以防漏筛。3.4摇瓶液体培养3.5产物活性测定琼脂平板活性圈法纸片法:发酵液浓度高时琼脂薄层纸片法自动生化仪器分析法(水解酶、有机酸）透明圈01（产酸菌）变色圈02（工具菌+待检菌）生长圈03（抗生素）抑菌圈043.6数据调整与菌株特性分析菌株产量的检测的两种误差：A）摇瓶培养条件变化影响遗传特性的表达；B）检测过程中的误差。所以，对摇瓶发酵液的测试数据要尽量应用生物学统计方法来处理，以便从复杂的差异中，去伪存真，找出其中的规律性。在试验过程中的每个阶段，都要周密地观察并记录菌株特性。然后综合菌落的形态特征、培养特征及生化特征作为初筛时挑选菌落的依据。要对筛选过程中摇瓶产量数据的分布作全面分析，以便帮助判断诱变剂、诱变剂量及筛选条件的选择是否恰当。3.7培养基和培养条件的调整表型=基因型＋环境改变环境条件（调整培养配方和培养条件），使变株得到充分表达的机会，使高产性状及其他优良特性完全发挥出来，3.7培养基和培养条件的调整1正交的含义数学上：是把各个因素(如培养基中各种组成成分)的不同水平(各组成成分的不同含量)相互只遇一次的搭配，正交设计：在任意两因素间保持因素水平的严密正交性。优点：A）使参与试验的各因素的不同水平之间保持严密的正交；B）使试验全部因素的不同水平均衡地分布在有限处理中，用少数几个处理就能获得比较丰富的试验信息，得出较全面的结论；C）能给试验因素间的交互作用及试验误差以恰当的估计。培养基和培养条件的调整正交试验设计的方法步骤确定试验的培养基组成成分(因素)和每种组成成分所取的含量(水平)2正交试验设计的方法步骤3.7培养基和培养条件的调整选用正交表表头设计列出试验方案实施实验方案3.7培养基和培养条件的调整正交试验设计的方法步骤灰黄霉素产生菌D-756发酵特性研究试验方案。3.7培养基和培养条件的调整正交试验结果A.极差分析统计试验结果计算K、R值因素与试验结果的关系图Na》大米粉》KCl比较各因素的作用3.7培养基和培养条件的调整B.方差分析为了判断实验因素之间的差异是来自于随机误差还是来自于其本质的差异，可以通过计算方差，得出F