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氨基酸的分离鉴定——纸层析法;一、实验目的;二、实验原理;三、实验器材;四、实验试剂;实验试剂;(3)点样:用毛细管将各氨基酸样品分别点在中间3个记号(×)上,风干后再点一次。每点在纸上扩散的直径,最大不超过3mm。每人须点3个样,其中2个是已知样,1个是待测样品。;(4)层析:用双面胶将滤纸粘成筒状,点样面向外,纸的两侧边缘不能接触且要保持平行,参见图3-3。向培养皿中加入扩展剂,使其液面高度达到1cm左右,将点好样的滤纸筒直立于培养皿中(点样的一端在下,扩展剂的液面在A线下约1cm),罩上大烧杯,仍用塑料薄膜密封。当展开剂上升到8~10cm,取出滤纸,剪断双面胶连线,立即用电吹风热风吹干。;(5)显色:用喷雾器在通风厨中向滤纸上均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液,然后立即用热风吹干,即可显出各层析斑点,参见左图。;(6)计算各种氨基酸的Rf值,并判断混合样品中都有哪些氨基酸,各人将自己的实验结果贴在实验报告上,见表3-2。
(7)以层析时间为横坐标,扩展剂上升高度为纵坐标画图,求出扩展剂上升到18cm时所需要的时间。
(8)将微量注射器内外用蒸馏水清洗干净,倒掉用过的展层液和平衡液,将培养皿洗净,整理好桌面上的仪器和试剂,并注意清洁自己的操作台,请老师验收,实验报告当场交给老师。
计算:Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到
溶剂前沿的距离?;纸层析结果
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