苏丹红Ⅰ与草甘膦对卵母细胞成熟的毒性及作用机制.pdfVIP

目录

摘要I

ABSTRACTIII

缩略词V

前言VII

第一部分文献综述1

第一章苏丹红Ⅰ的研究进展1

1.苏丹红Ⅰ的理化性质1

2.苏丹红Ⅰ的毒性作用及机制2

2.1苏丹红Ⅰ的致癌性2

2.2苏丹红Ⅰ的遗传毒性2

2.3苏丹红Ⅰ的致敏性3

2.4苏丹红Ⅰ代谢产物的毒性3

3.小结3

第二章草甘膦的研究进展5

1.草甘膦的理化性质5

2.草甘膦的毒性作用及机制5

2.1草甘膦的致癌性与遗传毒性5

2.2草甘膦的神经毒性6

2.3草甘膦的肝肾毒性6

2.4草甘膦的生殖毒性7

3.小结8

第三章卵母细胞成熟的研究进展9

1.哺乳动物卵母细胞成熟9

1.1卵母细胞减数分裂过程9

1.2卵母细胞成熟的判定9

2.调控卵母细胞成熟的因素10

2.1细胞骨架10

2.2细胞器重组10

3.小结12

第二部分试验研究13

第一章苏丹红Ⅰ诱导卵母细胞细胞骨架异常和线粒体功能障碍13

1.材料与方法13

1.1抗体和试剂13

1.2主要仪器设备14

1.3抗体和试剂的配制15

1.4道德声明与实验动物16

1.5卵母细胞的获取和体外培养16

1.6苏丹红Ⅰ和褪黑素处理16

1.7转录组测序17

1.8免疫荧光染色17

1.9线粒体17

1.10JC-117

1.11活性氧检测17

1.12早期凋亡Annexin-V18

1.13荧光强度分析和数据分析18

1.14实时定量荧光PCR18

1.15线粒体拷贝数的测定18

1.16引物序列18

2.结果与分析19

2.1苏丹红Ⅰ暴露影响了卵母细胞成熟19

2.2苏丹红Ⅰ暴露破坏了纺锤体组装和肌动蛋白分布21

2.3苏丹红Ⅰ暴露影响了卵母细胞整体mRNA表达23

2.4苏丹红Ⅰ暴露破坏了线粒体功能25

2.5苏丹红Ⅰ暴露诱导了卵母细胞氧化应激和早期凋亡27

3.讨论30

4.小结32

第二章草甘膦诱导卵母细胞细胞器功能障碍和氧化应激33

1.材料与方法33

1.1.1抗体和试剂33

1.1.2猪卵母细胞培养液34

1.2主要仪器设备35

1.3抗体和试剂的配制35

1.4动物来源及卵母细胞的获取36

1.5草甘膦处理36

1.6线粒体、内质网和溶酶体的检测36

2+

1.7Ca和高尔基体的检测36

1.8ROS水平检测37

1.9免疫荧光染色37

1.10蛋白印迹检测37

1.11卵丘颗粒细胞扩散程度的检测37

1.12线粒体拷贝数的检测37

1.13实时定量荧光PCR37

1.14引物序列38

1.13荧光强度分析和统计分析39

2.结果与分析39

2.1草甘膦对猪卵母细胞发育的影响39

2.2草甘膦对猪卵母细胞线粒体功能的影响40

2.3草甘膦对猪卵母细胞内质网的影响43

2.4草甘膦对猪卵母细胞溶酶体的影响45

2.5草甘膦对猪卵母细胞高尔基体和核糖体的影响47