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色谱柱的维护保养;2;;4;HPLC色谱柱维护保养概要:
收到新的色谱柱
管路和接头
流动相注意事项
色谱柱的保护
保护柱
色谱柱的清洗
色谱柱的保存;核实色谱柱的信息
是你订购的色谱柱吗?
规格是否正确?
固定相是否正确?
检查物理性损坏
用标准测试样品在标准条件下测试柱子，以验证柱效
每支菲罗门色谱柱都经过单独检测;色谱性能取决于整个系统，而不仅仅是色谱柱
管路和接头会造成系统的死体积
系统死体积会导致:
峰展宽
峰形差
柱效降低
灵敏度降低;优化HPLC系统以获得最大性能
改变连接管路的内径（id）
0.17mmid到0.12mmid
减小流通池的体积
标准流通池–13μL,10mm路径
半微量流通池–5μL,6mm路径
条件
Luna?3μmC18(2),10x2.0mm
(MercuryMS?柱芯)
50:50乙腈/水，0.2mL/min
HP1100w/二元泵;优化前
峰宽
峰3:0.072min
峰4:0.085min
峰5:0.103min
分辨率3/4=2.06
分辨率4/5=1.89;泵到进样器
可以使用大一点的内径(0.010”=0.254mm)
进样器到色谱柱
管路内径最小化
通常使用0.007”(0.178mm)或0.005”(0.127mm)ID
色谱柱到检测器
管路内径最小化
大一些的内径会影响分离效果
通常使用0.007”或0.005”ID
检测器到废液瓶
可以使用更大的内径(?0.010”);11;并非所有的色谱柱和接头都一样
使用锥箍的种类/形状也各有不同
固定长度不同(0.080”到0.130”)
固定长度很关键
管路一定要与色谱柱相匹配
不匹配的接头会导致死体积的增大或漏液
手紧接头(聚合物的)
容易使用
一体的
符合柱头的形状;色谱柱柱头;不同厂商的接头;如果超出锥箍的管路长度过长，锥箍将固定不当，导致漏液;彻底冲洗HPLC泵和管路以去除气泡（打开冲洗阀来加速过程）
连接色谱柱和进样器
检查流向是否与色谱柱标签指示方向一致
流动相起始流速为0.1mL/min，随后逐渐增大到正常流速
停止流速并将色谱柱与检测器入口连接
重启流速，用10-30个柱体积的流动相平衡色谱柱
含有离子对的流动相平衡所需时间更长;使用HPLC级溶剂
使用最高纯度的化学药品和试剂
使用前脱气和过滤所有流动相
保证溶剂是互溶的
验证缓冲盐在混合水/有机流动相中的溶解度
（尤其采用从高水相到高有机??的梯度洗脱时）
检查样品在流动相中的溶解度;流动相;保持pH在2.0到8.0之间（旧型硅胶和极性封尾相）或在1.5到10.0之间（新型硅胶）
低pH会使键合相从硅胶上断裂下来（水解）
高pH会使硅胶溶解
如在接近pH极限下运行时，使用预饱和柱将使这些影响降到最低
更新型的介质可以提供更宽的pH稳定性(1–12);背压通常保持在3500psi以下（常规的HPLC柱和系统）
UHPLC柱具有更高的压力限（≥9000psi）
流速必须符合色谱柱的背压限
避免突然的压力变化
万一背压升高，可以反冲色谱柱（向色谱柱制造商核实一下）;为什么要这么做呢?
最大限度地延长色谱柱的寿命
减少系统损耗
从长远来看，可以节约时间和成本
获得最佳的结果
怎样去做?
流动相入口过滤头
在线过滤器
保护柱
流动相脱气
过滤所有流动相组分
过滤所有样品;样品基质是HPLC/UHPLC柱主要的污染物来源，常会导致:
背压升高
色谱性能降低
峰形问题（分叉，拖尾）
柱效降低
分辨率降低;在向HPLC/UHPLC柱进样前，去除潜在的污染物
过滤样品(0.45或0.2μm针式滤头)
样品净化–例如SPE,蛋白沉淀等;优点
通过去除颗粒和强保留的样品组分来保护昂贵的分析色谱柱
延长分析色谱柱的使用寿命
保持高柱效
节约成本
缺点
额外的管路和接头给系统增大了死体积
峰展变宽
保留时间变化;SecurityGuard?;SecurityGuard?;保护使免受有害化学污染物和微粒的伤害
不会改变色谱图
操作简易
兼容几乎所有UHPLC、核-壳和亚-2μm柱，2.0到4.6mmID
压力到20,000psi(1,378bar);延长色谱柱寿命;色谱柱的维护保养;咨询色谱柱制造商获取推荐的清洗程序和限制条件
采用不带缓冲盐的流动相冲洗色谱柱以去除缓冲盐
采用10倍柱体积的互溶溶剂冲洗，如甲醇或乙腈
采用20倍柱体积的强溶剂（THF或IPA）以去除强吸附样品组分
颠倒程序并用流动相平衡;色谱柱保存条件影响色谱柱的使用寿命
从不用缓冲盐保存色谱柱（长期保存）
采用10倍柱体积且不带缓冲盐的流动相冲洗以除去缓冲盐
对硅胶基
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