《RNAi作用机制》课件.pptVIP

*******************RNAi作用机制RNA干扰（RNAi）是真核生物中一种重要的基因调控机制，在生物体发育、免疫应答等方面发挥着重要作用。RNAi机制主要包括siRNA和miRNA两种途径，通过降解靶mRNA或抑制其翻译来沉默基因表达。RNAi概述定义RNA干扰（RNAi）是一种由双链RNA（dsRNA）介导的基因沉默机制。它可以特异性地降解与dsRNA序列互补的靶mRNA，从而抑制基因表达。机制dsRNA被Dicer酶切割成短的干扰RNA（siRNA）或微小RNA（miRNA）。siRNA和miRNA与RNA诱导沉默复合体（RISC）结合，引导RISC降解靶mRNA。RNAi发现历程1990s科学家发现线虫中存在一种名为“RNA干扰”（RNAi）的现象。RNAi是一种基因沉默机制，可以抑制特定基因的表达。1998Fire和Mello证明了双链RNA（dsRNA）可以引发RNAi。2001研究人员发现短干扰RNA（siRNA）可以引发RNAi。2006Fire和Mello因发现RNAi获得了诺贝尔生理学或医学奖。RNAi的生物学意义基因表达调控RNAi是细胞中一种重要的基因沉默机制，可以精确地调控基因表达。抗病毒防御RNAi能够识别并降解病毒的RNA，从而抑制病毒的复制和感染。发育和分化RNAi在细胞发育和分化过程中起着重要的作用，调控不同组织器官的形成。疾病治疗RNAi技术可以用于治疗遗传疾病、感染性疾病和癌症等疾病。siRNA结构与特点siRNA是双链RNA，长度约为20-25个核苷酸。siRNA两端具有5磷酸基团和3羟基，具有明确的二级结构，两条链通过氢键结合。siRNA的5端通常具有2个突出碱基，而3端通常具有2个碱基的突出。siRNA的序列特异性决定了其靶基因沉默的效率和特异性，不同的siRNA具有不同的靶向效率。miRNA结构与特点miRNA是一种小的非编码RNA，长度约为22个核苷酸，在真核生物中普遍存在。miRNA通常包含一个茎环结构，通过Dicer酶加工产生成熟的miRNA，参与基因沉默调控，抑制靶基因的表达。RNAi在细胞内的分子过程1基因沉默靶基因表达受抑制2RISC复合体形成siRNA或miRNA结合RISC3双链RNA降解Dicer酶切割dsRNA4双链RNA识别细胞内识别dsRNARNAi在细胞内是一个多步骤的分子过程。首先，细胞会识别并降解双链RNA。然后，Dicer酶会将dsRNA切割成siRNA或miRNA。接着，siRNA或miRNA会与RISC复合体结合，并引导RISC复合体降解靶基因mRNA，从而沉默靶基因的表达。siRNA在细胞内的作用机制1siRNA进入细胞siRNA可以通过转染、病毒载体等方式进入细胞，并进入细胞质。2与RISC结合siRNA与RNA诱导沉默复合物（RISC）结合，并被RISC中的核酸酶Dicer切割成双链RNA。3靶向降解mRNAsiRNA与RISC结合后，siRNA的正义链被降解，反义链作为引导链与目标mRNA结合。4沉默目标基因RISC中的核酸酶Argonaute2（Ago2）切割目标mRNA，使其失去翻译功能，从而达到沉默目标基因的目的。miRNA在细胞内的作用机制1转录miRNA基因被转录成初级转录本（pri-miRNA）。2加工pri-miRNA在细胞核中被Drosha酶加工成前体miRNA（pre-miRNA）。3转运pre-miRNA被转运到细胞质中。4剪切在细胞质中，pre-miRNA被Dicer酶剪切成成熟的miRNA。5沉默成熟的miRNA与RISC蛋白复合物结合，通过碱基配对的方式识别靶mRNA并抑制其翻译或降解。siRNA靶向基因沉默靶向基因沉默siRNA可与靶mRNA序列互补配对，诱导靶mRNA降解，从而沉默靶基因表达。沉默机制siRNA引导RISC复合体识别靶mRNA，并切割降解靶mRNA，导致靶基因沉默。基因沉默应用siRNA靶向基因沉默可用于研究基因功能，开发治疗疾病的新方法。miRNA调控基因表达miRNA与mRNA结合miRNA通过碱基配对与靶mRNA结合，通常位于3UTR区域。沉默复合物形成结合后，miRNA与RISC（RNA诱导沉默复合物）结合，形成沉默复合物。mRNA降解沉默复合物可抑制翻译或导致靶mRNA降解，从而抑制基因表达。基因表达调控miRNA调控基因表达是一个复杂的过程，涉及多个蛋白质因子和信号通路。RNAi调控基因表达的生理功能11.参与细胞生长发育RNAi参与