生物发酵培养技术.ppt

不锈钢板框压滤机澄清型管式分离机SSC600-NG三足式沉降离心机19XKZ全自动压滤机由于生物反应液的粘度很大，直接分离往往比较困难，因此，常常对其进行预先的前期处理，来提高分离效果。常见的预处理技术有：使细胞老化凝聚成团，加热，改变PH值，添加化学物质促进凝聚，如加入高分子电解质、氯化钙、胶态粘士。0302010504064、固体物质的前期预处理技术进一步把已经分离的溶液浓缩，提高目的产物浓度的方法，称为初步分离。1初步分离的具体方法可以分为：2蒸发3萃取4沉淀5膜分离6（二）初步分离蒸发是通过加热，使溶液中的水经过汽化除去要提高溶质浓度、为溶质的析出创造条件的一种操作方法。1各种代谢物，如氨基酸、抗生素、酶都可以进行蒸发操作。2由于生物产品大多数是热敏性物质，所以物料在蒸发器内的停留时间必须尽可能短，同时，还应该昼避免局部液体过热。31、蒸发LG系列离心式刮板薄膜蒸发器示意图蒸发设备

连续流动膜式蒸发器，

长管膜式蒸发器，

强制膜式蒸发器，

离心膜蒸发器。萃取是通过物质在2种溶液之间不同的溶解度，来实现分离的操作方法。1萃取的分类2有机溶剂萃取3双水相萃取42、萃取许多抗生素都能够溶解在有机溶剂之中，如乙酸乙酯、乙酸丁酯、因此，通过萃取，可使得抗生素从水相进入有机相之中，从而实现分离。1由于抗生素在有机溶剂之中极不稳定，因此，在保证萃取效率的前提条件下，必须尽量缩短操作时间。2有机溶剂萃取设备可使用Podbielniak离心萃取机。3（1）有机溶剂萃取SFT-150超临界萃取反应仪利用萃取法来提取抗生素，具有质量好、收率高、速度快的优点。双水相萃取法，目前用于进行酶、和蛋白质的提取工艺。使用2种互不相溶的高聚物，如聚乙二醇（PEG）、葡聚糖，分别将它们溶于水中形成双水相，利用目的产物在双水相中不同的分配系数而实现分离的方法，称为双水相萃取。01萃取之后的目的产物可以通过超滤法进行提纯。01双水相萃取材料--------（1）PEG--葡聚糖萃取系统，（2）PEG—磷酸钾萃取系统。01（2）双水相萃取蛋白质在PI时的溶解度最小。这是因为蛋白质在水中有均匀分布是由于同性电荷相斥的缘故，当PH=pI时，由于蛋白质分子不带电荷，于是开始相互凝聚、产生沉淀。02蛋白质在溶液中具有“等电点”的特性，而且其等电点与溶液PH值有关，PH值大，蛋白质呈负电，PH值小，蛋白质呈正电，当PH=pI（等电点）时，蛋白质不带电荷。013、沉淀（1）人工诱变法抗生素产生菌用紫外线、γ射线、X射线、快中子等物理方法，或者用亚硝酸、秋水仙素、氮芥子气、硝基胍等化学诱变剂处理，来提高抗生素的产量。Pesti于1979年提出用原生质体融合法来提高青霉素的产量。01我国四川抗生素研究所于1983年通过原生质体融合法生产麦迪霉素，产量提高40%。02（2）原生质体融合法（3）体外DNA重组法采用体外DNA重组技术来改良抗生素生产菌。英国D.Flopwood首次在链霉菌之间进行了基因转移。产生出世界首创的杂合抗生素-------麦迪紫红素。生产用菌种--------原始材料--------培养基------程序-------生产细则-------以青霉素为例讲解六：发酵生产过程青霉素发现者弗莱明所用菌种---黄青霉菌原始材料---α-氨基已二酸、半胱氨酸、缬氨酸。发酵方法----加前体物质的深层发酵法。青霉素（penicillin）沙土管菌种↓转移到固体琼脂斜面培养基上，24℃培养5-6天，获得芽孢↓芽孢悬浮于无菌水中，进行摇瓶培养↓进入移种瓶培养↓进种子罐，接种量为5%-10%↓进繁殖罐，28℃培养48-96小时↓进入发酵罐，开始生产。↓鼓式过滤↓第一次萃取器↓纯化柱↓第二次萃取器↓第三次萃取器↓真空结晶釜↓瓷过滤器↓结晶洗涤釜↓真空干燥器（结束）程序使用消沫剂，由于发酵过程中产生大量的CO2，会产生大量泡沫。可采用植物油、豆油、合成消沫剂进行消沫处理。温度控制在24-30℃、PH值控制在6.8--7.2。应该注意控制残糖量、还原糖量、PH值、氨、氮、溶解氧量。发酵过程中要注意通气搅拌，所通入的空气必须是无菌的。发酵罐必须保持正压（20-30kPa），以防罐外不洁净的空气流入。目前国际上青霉素发酵的水平已经达到8万多单位/ml，相当于50g/L。生产细则01灭菌操作是为了保证杂菌不进入工业发酵系统。02灭菌项目03灭菌方法04灭菌的矛盾之处05具体的灭菌技术七：灭菌技术对通