DB32T 4964-2024 粳稻品种真实性和纯度SSR分子标记检测法.docx

ICS65.020.20

CCSB21

江苏省地方标准

DB32/T4964—2024

粳稻品种真实性和纯度SSR分子标记检测法

VarietygenuinenessandpuritytestingofjaponicaricewithSSRmarkers

2024-12-27发布 2025-01-27实施

江苏省市场监督管理局 发 布

中 国 标 准 出 版 社 出 版

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Ⅲ

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Ⅰ

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目 次

前言 Ⅲ

范围 1

规范性引用文件 1

术语和定义 1

总则 1

检测方法 2

基本要求 2

真实性检测 2

纯度检测 2

引物合成 2

结果报告 5

附录A（资料性）等位基因扩增片段信息 6

前 言

本文件按GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件江苏省农作物标准化技术委员会提出、归口并组织实施。

本文件起草单位：扬州大学、江苏省种子管理站。

本文件主要起草人：冯志明、左示敏、陈宗祥、宋锦花、杨华、方明奎、沈雨晴、吕甜、高鹏、纪萌萌、杜海波。

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粳稻品种真实性和纯度SSR分子标记检测法

范围

本文件给出了粳稻（OryzasativaL.japonica）品种真实性，描述了检测方法和结果报告。

本文件适用于江苏地区推广的粳稻品种的真实性验证和真实性身份鉴定，也适用于粳稻常规种、杂交种及其亲本的纯度检测。江苏籼稻品种（包括常规种、杂交种及其亲本）的真实性和纯度测定可参照执行。

本文件不适用于粳稻实质性派生品种和转基因品种的鉴定。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，标注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不标注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T39917—2021 主要农作物品种真实性和纯度SSR分子标记检测 稻

术语和定义

GB/T39917—2021界定的术语和定义适用于本文件。

总则

简单序列重复（SSR）是一类由2个~6个碱基组成的串联重复DNA序列。水稻不同品种在SSR重复次数上会存在差异，这种差异可在世代间稳定遗传。筛选在品种间重复次数变异丰富的SSR位点是利用SSR分子标记鉴定品种真实性和纯度的关键。

采用固定数量的SSR引物对抽取品种的代表性样品DNA进行扩增和电泳检测，并通过与标准样品比较或与已知品种SSR指纹数据库比对，可对抽样品种的真实性或身份进行鉴定。筛选能够鉴别品种群体中异常个体的SSR引物，进而利用其检测该品种的一定数量个体，根据检测到的异常个体数占比，可对该品种的整体一致性或纯度作出评价。

中国栽培稻分为籼稻和粳稻两个亚种，江苏水稻以粳稻为主。籼稻和粳稻在基因组组成和生态适应性上存在明显差异，造成一些SSR位点的重复次数差异在籼稻品种间广泛存在，但却不存在于粳稻品种间。依据江苏粳稻品种间的序列变异特征，筛选在品种间变异丰富的SSR位点，结合GB/T39917—2021中的SSR位点和检测流程，可提高SSR标记在江苏粳稻品种真实性和纯度检测中的鉴定效率。

检测方法

基本要求

检测平台、样品要求、仪器设备、试剂溶液配制、检测程序、DNA提取、PCR扩增、扩增产物分离和数据分析应符合GB/T39917—2021的规定。

真实性检测

根据分辨率高、多态性信息含量值高、染色体分布均匀、与GB/T39917—2021间的衔接等筛选原则，本文件确定76对SSR引物作为江苏粳稻品种真实性鉴定引物，其中48对为GB/T39917—2021中的引物（编号为PR01~PR48），另外28对为新增引物（编号为R49~R76）见表1。

利用76对引物构建江苏已知粳稻品种及部分杂交籼稻品种的SSR指纹数据库。各对引物扩增的部分代表性带纹和品种见附录A。

进行品种真实性验证检测时，将76对SSR引物分为Ⅰ组和Ⅱ组两组依次进行，其中Ⅰ组为GB/T39917—2021中的48对引物；Ⅱ组为新增的28对引物。在Ⅰ组引物检测中，若检测到可以判定“否定”结果的差异位点数的，终止检测；未检测到或检测到但未达到可以判定“否定”结果的差异位点数的，应继续完成Ⅱ组引物的检测。

进行品种真