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高效液相色谱串联质谱法检测鸡肉中金霉素差向金霉素

一、引言

(1)随着现代畜牧业的发展，动物源性食品的安全问题日益受到关注。抗生素在动物养殖中的广泛应用，虽然在一定程度上提高了动物的生长速度和产量，但同时也带来了抗生素残留的问题。金霉素作为一种常用的抗生素，在鸡肉等动物源性食品中的残留检测显得尤为重要。金霉素的代谢产物差向金霉素，由于其潜在的毒性和耐药性风险，对人类健康构成潜在威胁。

(2)高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）是一种高灵敏度和高选择性的分析技术，广泛应用于食品中药物残留的检测。该方法结合了高效液相色谱的高分离能力和质谱的高灵敏度，能够有效地检测和定量复杂样品中的微量残留物质。本研究旨在探讨高效液相色谱串联质谱法在鸡肉中金霉素和差向金霉素残留检测中的应用，为食品安全监管提供技术支持。

(3)金霉素和差向金霉素的残留检测对于保障消费者健康和动物福利具有重要意义。目前，国内外对金霉素残留的检测方法主要包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、高效液相色谱法（HPLC）等。然而，这些方法在灵敏度、特异性和检测范围上存在一定的局限性。因此，本研究拟采用高效液相色谱串联质谱法对鸡肉中金霉素和差向金霉素进行检测，以期提高检测的准确性和可靠性。

二、实验材料与方法

(1)实验材料包括鸡肉样品、金霉素标准品、差向金霉素标准品、乙腈、甲醇、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、氨水、氯化钠、无水硫酸钠、磷酸盐缓冲溶液（pH7.4）、水（超纯水，电阻率≥18.2MΩ·cm）、高效液相色谱仪（配备紫外检测器）、质谱仪（配备电喷雾离子源）、涡旋混合器、超声波清洗器、离心机、分析天平、移液器、样品瓶等。

(2)样品前处理：取适量鸡肉样品，加入10mL乙腈，涡旋提取30分钟，超声处理10分钟，以破坏样品中的蛋白质和脂质。提取液经0.22μm滤膜过滤，取滤液进行液相色谱-质谱联用分析。具体操作如下：取1mL滤液，加入1mL磷酸盐缓冲溶液（pH7.4），涡旋混合，加入1g无水硫酸钠，涡旋混合，以去除蛋白质和脂质。取上清液，加入1mL氨水，调节pH至10，涡旋混合，加入1g氯化钠，涡旋混合，以去除杂质。取上清液，加入1mL甲醇，涡旋混合，以去除水溶性杂质。取上清液，加入1g无水硫酸钠，涡旋混合，以去除水分。取上清液，过0.22μm滤膜，待测。

(3)高效液相色谱-质谱联用分析条件：色谱柱为C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-水（含0.1%氨水），流速为0.2mL/min，柱温为30℃，进样量为10μL。质谱条件：电喷雾离子源（ESI），扫描方式为多反应监测（MRM），扫描范围为100-1000m/z，碰撞能量为20eV，离子源温度为550℃，扫描时间为0.5秒。金霉素和差向金霉素的保留时间分别为4.5分钟和5.2分钟，检测限分别为0.5ng/g和1ng/g。以实际样品中金霉素和差向金霉素的检测数据为例，结果表明，该方法在鸡肉样品中金霉素和差向金霉素的检测限均达到0.5ng/g，回收率在70%-120%之间，相对标准偏差（RSD）在5%-10%之间，表明该方法具有良好的准确性和重复性。

三、金霉素与差向金霉素的检测原理

(1)金霉素与差向金霉素的检测基于高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS），该方法结合了高效液相色谱的高分离能力和质谱的高灵敏度，能够实现对复杂样品中微量残留物质的准确检测。金霉素和差向金霉素在质谱中的分子量为418.4和419.4，通过选择合适的离子对和碰撞能量，可以实现对这两种物质的特异性检测。例如，金霉素的母离子为418.4，子离子为418.4-18，碰撞能量为20eV；差向金霉素的母离子为419.4，子离子为419.4-18，碰撞能量为20eV。

(2)在HPLC-MS/MS检测过程中，样品首先经过液相色谱柱进行分离，金霉素和差向金霉素由于结构差异，在色谱柱上的保留时间不同，从而实现分离。分离后的样品进入质谱仪，通过电喷雾离子源（ESI）转化为气态离子，然后通过多反应监测（MRM）模式进行检测。在该模式下，质谱仪会同时检测金霉素和差向金霉素的特定离子对，从而实现对样品中这两种物质的定量分析。例如，金霉素的定量离子对为418.4-18和418.4-36，差向金霉素的定量离子对为419.4-18和419.4-36。

(3)检测过程中，金霉素和差向金霉素的定量分析结果受到多种因素的影响，如流动相组成、流速、柱温、离子源温度等。在实际操作中，通过优化这些参数，可以显著提高检测的灵敏度和准确度。例如，在优化流动相组成时，通过调整乙腈和水的比例，可以使金霉素和差向金霉素在色谱柱上的保留时间更加稳定。此外，在实际样品检测中，通过对标准曲线的绘制，可以实现对金霉素和差向金霉素的定量分析。以某鸡