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超高效液相色谱-串联质谱法测定花椒中罗丹明B的含量

一、引言

(1)花椒作为一种传统的调味品和药用植物，在我国有着悠久的历史和广泛的应用。其独特的风味和丰富的营养成分使其在食品加工和医药领域备受关注。然而，随着食品添加剂的滥用问题日益严重，确保花椒等食品的安全性成为了一个亟待解决的问题。罗丹明B作为一种人工合成的偶氮染料，由于其具有鲜艳的颜色和良好的着色效果，被非法添加到食品中以提高产品的感官吸引力。因此，建立一种快速、准确、灵敏的检测方法对于保障消费者健康具有重要意义。

(2)超高效液相色谱-串联质谱法（UHPLC-MS/MS）是一种高效、灵敏的分析技术，广泛应用于食品、药品和环境样品中的污染物检测。该方法结合了液相色谱的高分离能力和质谱的高灵敏度、高选择性，能够实现对复杂样品中目标化合物的精确定量。本研究旨在建立一种基于UHPLC-MS/MS的检测方法，用于花椒中罗丹明B的定量分析，为花椒等食品的安全性评价提供技术支持。

(3)本研究首先对花椒样品进行前处理，包括提取、净化和浓缩等步骤，以去除干扰物质，提高检测的灵敏度和特异性。随后，通过优化UHPLC-MS/MS的色谱条件和质谱参数，实现对罗丹明B的准确检测。通过对方法的线性、精密度、准确度和灵敏度等指标进行评估，验证了该方法的可靠性和实用性。本研究结果将为花椒中罗丹明B的检测提供科学依据，有助于保障消费者食品安全。

二、实验部分

(1)实验样品采集自市场购买的多种花椒产品，包括干辣椒、花椒油和花椒粉等。每个样品均重复采集3份，以确保数据的可靠性。样品采集后，在-20°C条件下储存，待分析前取出解冻。实验前，对样品进行预处理，包括粉碎、过筛（筛孔直径为0.25mm）和均质化处理。预处理后的样品用50%甲醇溶液进行超声提取，提取液经离心后，取上清液进行净化。净化步骤包括使用固相萃取小柱（C18）对提取液进行净化，以去除杂质和干扰物质。净化后的溶液在50°C下浓缩至近干，再用流动相复溶于适当体积的溶液中，待测。

(2)UHPLC-MS/MS分析系统采用WatersAcquityUPLCI-Class超高效液相色谱系统和ABSciexTripleTOF5600三重四极杆串联质谱系统。色谱柱为WatersAcquityUPLCBEHC18柱（2.1mm×100mm，1.7μm）。流动相为甲醇-水（含0.1%甲酸），流速为0.4mL/min。梯度洗脱程序如下：初始条件为70%甲醇，在1分钟内线性升至95%甲醇，保持5分钟，然后线性降至70%甲醇，保持5分钟。柱温设置为30°C。质谱条件为电喷雾离子源（ESI），正离子扫描模式，扫描范围为m/z100-1000。多反应监测（MRM）模式用于定量分析，罗丹明B的定量离子对为m/z254.2→m/z176.1，碰撞能量为20eV。通过优化碰撞能量和扫描时间，确保了高灵敏度和低背景噪声。

(3)为了验证方法的准确性和可靠性，对罗丹明B标准品进行了线性回归分析。实验结果表明，罗丹明B在0.5-20ng/mL的浓度范围内线性关系良好，相关系数R2为0.999。在低、中、高三个浓度水平（分别为1ng/mL、5ng/mL和10ng/mL）下，罗丹明B的日内精密度和日间精密度分别为2.1%、2.3%、1.5%和3.2%、3.5%、2.8%。加标回收率在85%-105%之间，表明该方法具有良好的准确性和重现性。通过实际样品的分析，该方法成功检测出3个样品中罗丹明B的含量，分别为2.5ng/g、3.8ng/g和1.2ng/g，与标准曲线计算结果相符。

三、结果与讨论

(1)本研究建立的UHPLC-MS/MS方法在花椒样品中罗丹明B的检测中表现出良好的性能。该方法具有较高的灵敏度，能够检测到低至0.5ng/mL的罗丹明B，满足食品安全检测的要求。同时，该方法具有较好的线性范围，在0.5-20ng/mL的浓度范围内，罗丹明B的响应值与浓度呈良好的线性关系，相关系数R2达到0.999。此外，该方法在低、中、高三个浓度水平下的日内精密度和日间精密度均低于5%，表明该方法具有良好的重现性。

(2)在实际样品分析中，该方法成功检测出3个样品中罗丹明B的含量，分别为2.5ng/g、3.8ng/g和1.2ng/g。与标准曲线计算结果相符，表明该方法具有较高的准确性和可靠性。此外，通过加标回收实验，该方法在85%-105%的范围内具有良好的回收率，进一步验证了该方法的准确性和实用性。与传统的检测方法相比，UHPLC-MS/MS方法具有更高的灵敏度和更快的分析速度，能够满足快速检测和大量样品分析的需求。

(3)本研究建立的UHPLC-MS/MS方法在花椒样品中罗丹明B的检测中表现出良好的性能，为花椒等食品的安全性评价提供了有力的技术支持。然而，