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高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中残留的19种喹诺酮类药物

一、1.概述

在食品检测领域，蜂蜜作为一种常见的天然甜味剂和营养食品，受到广泛消费者的喜爱。然而，随着抗生素的广泛应用，喹诺酮类药物作为一类广泛使用的抗菌药物，在畜牧业中得到了大量的使用。这导致了喹诺酮类药物在动物源性食品中的残留问题，其中蜂蜜作为动物产品之一，其安全风险引起了广泛关注。根据相关研究数据，喹诺酮类药物在蜂蜜中的残留量虽然较低，但仍然存在一定的安全隐患。例如，2016年欧洲食品安全局（EFSA）的一项报告指出，在检测的蜂蜜样品中，有10%的样品检测出了喹诺酮类药物残留，残留量为0.02～0.5ng/g。这一发现进一步强调了建立高效、灵敏的检测方法对于保障蜂蜜质量安全的重要性。

喹诺酮类药物是一类具有广谱抗菌作用的药物，主要包括诺氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星等。这些药物在治疗细菌感染方面具有显著疗效，但同时也存在一定的毒副作用。长期摄入含有喹诺酮类药物残留的蜂蜜可能导致人体产生抗药性，影响人体健康。为了确保消费者食用安全，各国食品安全监管部门对蜂蜜中的喹诺酮类药物残留量均制定了严格的限量标准。例如，我国《食品安全国家标准食品中兽药残留限量》规定，蜂蜜中恩诺沙星、氧氟沙星等喹诺酮类药物的最大残留限量分别为200ng/g。

近年来，随着液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）技术的快速发展，该方法在食品检测领域得到了广泛应用。LC-MS/MS技术具有灵敏度高、检测限低、选择性强、多组分同时检测等优点，非常适合用于复杂基质中喹诺酮类药物残留的检测。据统计，我国已有超过20家检测机构应用LC-MS/MS技术对蜂蜜中的喹诺酮类药物进行检测。例如，2019年，某检测机构利用LC-MS/MS技术对市场上采集的100份蜂蜜样品进行检测，结果显示，其中有5份样品检出喹诺酮类药物残留，残留量为0.03～0.2ng/g。这一检测结果为保障蜂蜜质量安全提供了重要依据。

二、2.样品前处理

(1)样品前处理是液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中喹诺酮类药物残留的关键步骤之一。由于蜂蜜样品基质复杂，含有大量的杂质，直接进样容易导致色谱柱堵塞和检测灵敏度下降。因此，前处理过程主要包括样品提取、净化和浓缩等步骤。提取过程中，常用的溶剂有乙腈、甲醇和乙酸乙酯等，它们可以有效提取蜂蜜中的喹诺酮类药物。例如，某研究采用乙腈作为提取溶剂，对50份蜂蜜样品进行提取，提取回收率在70%至90%之间，表明该方法具有良好的提取效果。

(2)在净化阶段，常用的净化方法有固相萃取（SPE）和液-液萃取（LLE）。SPE法利用固相吸附材料对目标化合物进行选择性吸附，从而去除样品中的杂质。例如，某研究采用C18固相小柱对提取液进行净化，净化回收率在90%至95%之间，杂质去除效果显著。而LLE法则是通过选择合适的有机溶剂与水相进行混合，实现目标化合物的分离。一项研究发现，使用正己烷和水的混合溶剂进行LLE，可以有效地将喹诺酮类药物从蜂蜜中分离出来，回收率在85%至95%之间。

(3)样品浓缩是前处理中的另一个重要环节，目的是降低样品的体积，提高检测灵敏度。常用的浓缩方法有旋转蒸发和氮吹等。旋转蒸发法是通过加热使溶剂蒸发，从而实现样品浓缩。一项研究采用旋转蒸发法对提取后的样品进行浓缩，浓缩后的样品体积从10mL降至1mL，检测灵敏度得到显著提高。而氮吹法则是利用氮气将溶剂吹除，实现样品浓缩。某研究对蜂蜜样品进行氮吹浓缩，浓缩后的样品体积降至0.5mL，检测灵敏度进一步得到提升。在实际操作中，样品前处理的效果对后续的LC-MS/MS检测至关重要，因此需要严格控制前处理条件，以保证检测结果的准确性和可靠性。

三、3.液相色谱-串联质谱法条件

(1)液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）在测定蜂蜜中喹诺酮类药物残留时，通常采用高效液相色谱（HPLC）与质谱（MS）联用技术。在HPLC方面，常用的柱子为C18反相色谱柱，柱温一般控制在30℃至40℃之间，流动相通常为水和乙腈或甲醇的混合溶液。流动相的比例和流速对分离效果有显著影响。例如，某研究采用水：乙腈（70:30，v/v）作为流动相，流速设置为0.8mL/min，实现了19种喹诺酮类药物的良好分离。在此条件下，样品的保留时间在1.5至6分钟之间。

(2)在质谱检测方面，通常采用电喷雾电离（ESI）源，正负离子扫描模式。对于喹诺酮类药物，多采用多反应监测（MRM）模式，选择特定的母离子和子离子进行检测，以提高灵敏度和特异性。例如，对于恩诺沙星，母离子为321.2m/z，子离子为354.2m/z；对于诺氟沙星，母离子为321.2m/z，子离子为363.2m/z。在MRM模式下，灵敏度可达到ng/L级别。某研究采用LC-MS/MS检测蜂蜜