高效液相色谱—串联四极杆质谱联用测定水果和蔬菜中赤霉素残留量.docxVIP

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高效液相色谱—串联四极杆质谱联用测定水果和蔬菜中赤霉素残留量

一、1.仪器与试剂

(1)本实验采用高效液相色谱—串联四极杆质谱联用仪（HPLC-MS/MS）进行水果和蔬菜中赤霉素残留量的测定。仪器型号为Agilent1290InfinityII，配备电喷雾电离源（ESI）和Agilent6460TripleQuad质谱仪。该系统具有高灵敏度、高分辨率和快速扫描能力，适用于复杂样品中痕量赤霉素的检测。在实验过程中，通过优化仪器参数，如扫描速度、碰撞能量等，以提高检测灵敏度和准确度。

(2)试剂方面，本实验所用赤霉素标准品购自Sigma-Aldrich公司，纯度≥98%。实验用水为超纯水，电阻率≥18.2MΩ·cm。流动相采用乙腈和0.1%甲酸溶液，其中乙腈为色谱纯，甲酸为分析纯。此外，实验中还使用了乙腈、甲醇、氨水等试剂，均为色谱纯。所有试剂在使用前均需进行过滤处理，以去除可能存在的杂质。

(3)在样品前处理过程中，可能需要使用到固相萃取柱（SPE柱）和氮吹仪等辅助设备。固相萃取柱选用C18柱，具有高容量和良好的选择性，适用于富集和净化样品中的赤霉素。氮吹仪用于样品的浓缩和净化，通过吹扫去除溶剂，降低检测限。在实际操作中，根据样品类型和基质特点，选择合适的SPE柱和氮吹条件，以确保实验结果的准确性和可靠性。例如，对于含有较多油脂的样品，可以选择ODS柱进行萃取；对于含有较多蛋白质的样品，则选择C18柱进行萃取。

二、2.样品前处理

(1)样品前处理是高效液相色谱—串联四极杆质谱联用测定水果和蔬菜中赤霉素残留量的关键步骤之一。首先，对采集的样品进行初步处理，包括样品的破碎、均质化等。对于水果类样品，通常采用机械破碎机进行破碎，以确保样品充分混合。蔬菜类样品则根据其质地不同，分别采用搅拌器或研磨机进行处理。均质化后的样品，需在低温下保存，以防止赤霉素降解。

(2)接下来，进行提取和净化步骤。提取过程中，根据样品类型和赤霉素的溶解性，选择合适的提取溶剂。通常采用乙腈、甲醇等有机溶剂进行提取。提取溶剂的选择应考虑其与样品的相容性、提取效率以及后续净化步骤的兼容性。提取完成后，将提取液转移至离心管中，并进行离心分离，去除不溶物。随后，采用固相萃取（SPE）技术对提取液进行净化。SPE柱通常选用C18或ODS柱，根据样品基质特性选择合适的SPE柱。通过SPE柱，可以去除样品中的杂质，提高检测的灵敏度。净化后的溶液再次进行离心分离，收集上层清液。

(3)净化后的清液进行浓缩和复溶于适宜的流动相中。浓缩过程中，使用氮吹仪将溶液中的有机溶剂吹除，直至接近干燥。随后，将干燥后的样品复溶于流动相中，进行进一步分析。对于某些基质复杂或含有较多油脂的样品，可能需要采用超声波辅助提取或采用特殊溶剂进行提取。此外，对于提取液中含有较多蛋白质的样品，可能需要添加一定量的蛋白抑制剂，以防止蛋白质对赤霉素检测的干扰。样品前处理过程中，还需严格控制操作条件，如提取时间、离心速度等，以确保实验结果的准确性和重现性。

3.高效液相色谱—串联四极杆质谱联用条件

(1)在高效液相色谱—串联四极杆质谱联用（HPLC-MS/MS）测定水果和蔬菜中赤霉素残留量的实验中，流动相的选择对分离效果和检测灵敏度有重要影响。本实验采用乙腈-0.1%甲酸溶液作为流动相，其中乙腈作为有机相，甲酸作为缓冲液，以调节pH值。流动相的比例设置为乙腈：0.1%甲酸溶液=70:30（V/V）。在相同的流动相条件下，通过优化流速（1.0mL/min）和柱温（30°C），实现了赤霉素的快速分离和高效检测。例如，在检测苹果样品时，该流动相条件能够有效分离出赤霉素A1、A2、B1等主要成分。

(2)在电喷雾电离源（ESI）模式下，本实验采用多反应监测（MRM）模式进行定量分析。针对赤霉素A1、A2、B1等目标化合物，分别优化了其母离子和子离子的扫描条件。以赤霉素A1为例，其母离子为m/z295.2，子离子为m/z277.2，碰撞能量设置为20eV。通过优化碰撞能量，提高了子离子的丰度和信噪比。在相同的MS条件设置下，对其他赤霉素化合物也进行了类似的优化，确保了所有目标化合物的准确检测。

(3)在色谱柱选择方面，本实验采用C18反相色谱柱，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm。该色谱柱具有良好的分离性能和耐用性，适用于复杂样品中赤霉素的分离。在梯度洗脱条件下，流动相的初始比例为乙腈：0.1%甲酸溶液=90:10（V/V），保持2分钟，随后逐渐调整至乙腈：0.1%甲酸溶液=70:30（V/V），并在15分钟内完成梯度洗脱。通过优化梯度洗脱程序，实现了赤霉素与其他杂质的良好分离。例如，在检测菠菜样品时，该色谱柱和梯度洗脱条件能够将赤霉素A1、A2、B1等主要成分在1