液相色谱标液苯乙烯标液标定方法.docxVIP

PAGE

1-

液相色谱标液苯乙烯标液标定方法

一、1.标液准备

(1)标液准备是液相色谱标定过程中的关键步骤，首先需准确称取一定量的苯乙烯纯品。例如，若需制备浓度为1mg/mL的苯乙烯标准溶液，可准确称取1.0000g苯乙烯纯品，置于100mL容量瓶中。随后，加入少量无水乙醇，充分溶解后，用无水乙醇定容至刻度线。此过程中需注意避免空气中的水分和杂质对溶液的影响，确保溶液的纯净度。

(2)在制备苯乙烯标液时，通常采用高纯度的无水乙醇作为溶剂。无水乙醇的纯度应达到99.5%以上，以确保标液的准确性和可靠性。例如，在实际操作中，可以使用气相色谱仪对无水乙醇进行检测，确保其纯度符合要求。在定容过程中，需使用移液器精确量取无水乙醇，避免人为误差。此外，定容时应将容量瓶置于恒温环境中，以消除温度变化对溶液体积的影响。

(3)在完成苯乙烯标液的制备后，应将溶液置于避光、低温的环境中保存，以防止溶液降解。例如，可以将溶液置于棕色瓶中，置于4℃的冰箱中保存。在保存期间，需定期检查溶液的颜色、透明度等指标，以确保溶液的稳定性。在实际应用中，可通过对比不同保存时间下的标液浓度，验证其稳定性。例如，对制备的苯乙烯标准溶液进行每月一次的浓度复测，确保其浓度变化在可接受的范围内。

二、2.液相色谱仪设置

(1)在进行液相色谱标定前，首先需要对液相色谱仪进行细致的设置。以Agilent1200系列液相色谱仪为例，需要调整流速至1.0mL/min，确保进样针的压力不超过5psi。流速的设置对于苯乙烯的分离至关重要，过快或过慢的流速都可能影响分离效果和检测灵敏度。在实际操作中，通过调整泵的流量控制器，确保流速稳定在设定值。

(2)接下来，需要选择合适的色谱柱。对于苯乙烯的分离，常用的色谱柱材料为C18，柱长通常为250mm，内径为4.6mm。例如，可以使用Grace公司生产的DB-C18色谱柱。在柱温方面，一般设定在室温至40℃之间，根据具体实验条件进行调整。柱温对分离效果有显著影响，过高或过低的柱温都可能导致峰形变差和分离效率降低。

(3)对于检测器，液相色谱标定通常使用荧光检测器（FLD）或二极管阵列检测器（DAD）。以FLD为例，需设置激发波长和发射波长。对于苯乙烯，激发波长通常设定为232nm，发射波长为294nm。在实际操作中，通过调整检测器的波长设置，确保能够准确检测到苯乙烯的荧光信号。同时，需要调整检测器的增益和噪声水平，以确保检测信号的稳定性和灵敏度。例如，在测试过程中，通过多次调整和优化，确保检测信号的信噪比达到至少10:1。

三、3.标准曲线绘制

(1)标准曲线的绘制是液相色谱标定过程中的重要环节，它通过一系列已知浓度的苯乙烯标准溶液，建立浓度与峰面积之间的关系。在实验中，首先配制不同浓度的苯乙烯标准溶液，例如，0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL和5.0mg/mL。这些溶液在配制时需严格控制体积和纯度，确保实验的准确性。

接下来，使用液相色谱仪对每份标准溶液进行进样分析。在设定好的色谱条件下，记录苯乙烯的峰面积。例如，在Agilent1200液相色谱仪上，流速设定为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为232nm。通过多次进样，得到一系列峰面积数据。以峰面积为纵坐标，苯乙烯浓度为横坐标，绘制标准曲线。

在实际操作中，例如，在浓度为0.1mg/mL的标准溶液中，峰面积平均值为20000；在浓度为0.2mg/mL的标准溶液中，峰面积平均值为40000；在浓度为0.5mg/mL的标准溶液中，峰面积平均值为100000；在浓度为1.0mg/mL的标准溶液中，峰面积平均值为200000；在浓度为2.0mg/mL的标准溶液中，峰面积平均值为400000；在浓度为5.0mg/mL的标准溶液中，峰面积平均值为1000000。通过这些数据，可以绘制出一条线性关系良好的标准曲线。

(2)在绘制标准曲线时，需要注意标准溶液的浓度范围应覆盖待测样品的预期浓度范围。例如，若待测样品的浓度可能在0.5mg/mL至5.0mg/mL之间，则应配制至少6个不同浓度的标准溶液，以确保曲线的准确性。同时，每个浓度的标准溶液应至少重复进样三次，以减少实验误差。

在绘制标准曲线的过程中，可能遇到非线性关系的情况。这时，可以通过对数转换等方法对数据进行处理，以获得更准确的结果。例如，将峰面积数据进行对数转换后，绘制得到的曲线呈现良好的线性关系。在实际案例中，通过对数转换后的线性相关系数（R2）可以达到0.999，表明曲线拟合度非常高。

(3)完成标准曲线的绘制后，需对曲线进行评估，确保其准确性和可靠性。这包括检查曲线的线性范围、斜率、截距以及相关系数。例如，若曲线的线性范围为0.1mg/mL至5.