肝素酶活性的测定 编制说明.pdf

《肝素酶活力的测定分光光度法》（征求意见稿）编

制说明

（一）工作简况

1、任务来源

本标准根据国标委公布的2023年国家标准计划项目，本项目计划编号为T-469，名称为《肝素酶活力的测定分光光度法》。

本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口。

2、目的和意义

肝素酶可以催化肝素或者硫酸乙酰肝素的裂解反应，分为肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，

其最重要的用途之一是酶解肝素制备低分子量肝素，而低分子量肝素是最重要的

抗凝血药物之一。

肝素酶的酶活性是其质量的重要指标之一，鉴于目前我国并无统一的肝素酶

活性测定的方法标准，产品的实际酶活性和包装标识的酶活性是否一致还缺乏相

关的标准进行规范约束和验证，因此研制肝素酶活性的测定标准将为肝素酶的生

产、流通及监管提供依据，促进我国肝素行业以及肝素酶相关医药行业的健康发

展，具有非常重要的现实意义。

3、协作单位

本标准由清华大学主持，河北省食品检验研究院、中国测试技术研究院等单

位联合起草。

4、标准编制过程和主要工作过程

（1）2022年05月至11月，标准起草单位组织相关技术人员对《肝素酶活

力的测定分光光度法》标准项目进行了预研，起草组成员查阅资料，广泛收集

国内外近百余篇标准、文献，了解了国内外相关技术动态，并且明确了工作思路

和进程安排。

（2）2022年12月，标准起草单位在收到全国生化检测标准化技术委员会

项目征集通知后，提交了项目申报书以及国家标准草案工作组讨论稿。

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（3）2023年12月，收到全国生化检测标准化技术委员会文件《关于下达

2023年推荐性国家标准计划的通知》（生检标[2023]41号），《肝素酶活力的

测定分光光度法》标准项目立项，计划编号T-469。

（4）2024年1月至2024年12月，进行标准的起草研制工作。完成了《肝

素酶活力的测定分光光度法》标准（征求意见稿）及其编制说明，并对全国生

化检测标准化技术委员会汇报了标准（征求意见稿）的研制及修改情况，向全国

生化检测标准化技术委员会提交了标准（征求意见稿）和编制说明。

5、国家标准主要修订人及其所做的工作

本标准由清华大学主持，河北省食品检验研究院、中国测试技术研究院等单

位联合起草。

（二）国家标准编制原则和确定国家标准主要内容

1、标准编制原则

本标准的编制依据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的

结构和起草规则》，并参照了GB/T6379.1-2004《测量方法与结果的准确度（正

确度与精密度）第1部分总则与定义》、GB/T6379.2-2004《测量方法与结果的

准确度（正确度与精密度）第2部分确定标准测量方法重复性与再现性的基本方

法》、GB/T35538-2017《工业酶制剂测定技术导则》。

2、确定国家标准主要内容

本标准描述了肝素酶活性的测定方法。

本标准适用于生化试剂肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ活性的测定。

（三）主要试验（或验证）的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果

1、原理

肝素酶催化底物肝素或硫酸乙酰肝素裂解会生成4,5不饱和糖醛酸。4,5不饱

和糖醛酸在232nm波长下有特征吸收（图1），通过测定232nm下的吸光度的变

化，结合4,5不饱和糖醛酸的摩尔消光系数，计算酶活性。

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图1肝素酶催化生成的4,5不饱和糖醛酸的全波长扫描图

2、肝素酶酶活性测定方法的确立

由于酶的活性会受到温度、pH以及离子添加剂等多种参数的影响，因此选

取不同温度、不同pH、不同CaCl2浓度条件对肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的活性进行测定，

以确定酶的活性测定方法中的各项重要参数。此外，反应时间也会影响酶活性测

定的结果，因此该参数也需在方法中确立。