猪流行性腹泻免疫防控技术规程.docxVIP

1

规模猪场猪流行性腹泻免疫防控技术规程

1范围

本文件规定了规模猪场猪流行性腹泻的诊断、疫苗免疫和综合防控措施。本文件适用于规模猪场猪流行性腹泻的免疫、防控。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB13078饲料卫生标准

GB/T17824.2规模猪场生产技术规程

GB/T17824.3规模猪场环境参数及环境管理NY/T544猪流行性腹泻诊断技术

农业部农医发〔2017〕25号病死及病害动物无害化处理技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

猪流行性腹泻porcineepidermicdiarrhea（PED）

由猪流行性腹泻病毒(porcineepidermicdiarrheavirus，PEDV)引起猪的一种以腹泻、呕吐、脱水、食欲下降为特征的急性、高度接触性肠道传染病。

3.2

猪流行性腹泻病毒porcineepidemicdiarrheavirus（PEDV）

PEDV属冠状病毒科冠状病毒属，是一种具有囊膜的单股正链RNA病毒。

4诊断

4.1临床诊断

4.1.1临床症状

仔猪水样腹泻，或伴随于采食或吃奶后的呕吐，症状的轻重随年龄的大小而有差异，年龄越小，症状越重。1周龄内新生仔猪发生腹泻后3d～4d，呈现严重脱水而死亡，死亡率可达50％～100％；母猪常呈精神萎顿、厌食，持续性腹泻约1周，逐渐恢复正常。育肥猪感染可出现腹泻，一周后康复，死亡率为1%～3%。成年猪症状较轻，个别表现出呕吐症状，严重的水样腹泻3d～4d后可自愈。

4.1.2病理变化

2

解剖后，肉眼可见小肠膨胀，肠内充满大量白色或黄绿色液体，肠壁菲薄且缺乏弹性，以致肠管扩展呈半透明状，肠系膜血管扩张，淋巴结肿胀。

组织学损伤包括急性肠炎、弥漫性肠炎、萎缩性肠炎，浅表皮上皮细胞空化和结肠、盲肠皮下水肿。空肠绒毛上皮细胞出现空泡、脱落并坏死，随着感染程度而肠绒毛萎缩、变短逐渐严重。

4.2实验室诊断

4.2.1血清学检查

选择直接免疫荧光法、双抗体夹心酶联免疫吸附试验、血清中和试验、间接酶联免疫吸附试验等方法，按照NY/T554执行。

4.2.2分子生物学诊断

4.2.2.1病毒核酸的RT-PCR诊断

按照NY/T554执行。

4.2.2.2病毒核酸的实时荧光定量RT-PCR诊断

4.2.2.2.1样本的制备、核酸提取等按照NY/T554执行，扩增采用引物探针法：

a)PCR引物上游引物序列：F：5’-GCTTGCTTCGGACCCAGAGG-3’；

b)PCR引物下游引物序列：R:5’-ACGAACAGCCACATTACCACCAA-3’；

c)探针序列：5’-ACGAACAGCCACATTACCACCAA-3’分别标记FAM和BHQ1基团。

4.2.2.2.2体系组分配置：2×OneStepRT-PCRbuffer12.5uL，PEDV上游引物0.4uL，PEDV下游引物0.4uL，PEDV探针0.3uL，提取的核酸2.5uL，无DNAase和RNAase的水8.9uL（这里的

引物探针建议要标注出使用浓度），总反应体积25uL。

4.2.2.2.3反应条件，循环参数设置如下：

a)50℃条件下反转录15min；

b)95℃条件下预变性2min；

c)95℃条件下变性15s；

d)60℃条件下扩增30s，40个循环；

e)60℃时设置荧光信号的采集。

4.2.2.2.4结果判断如下：

a)若被检样品FAM通道Ct值≤36.0，且出现典型的“S”型扩增曲线，判定为PEDV核酸阳性；

b)若被检样品FAM通道无Ct值，且无典型的扩增曲线，判为PEDV核酸阴性；

c)若被检样品FAM通道Ct值＞36.0，且出现典型“S”型扩增曲线，建议对该样品进行重复试验，重复试验结果Ct值≤40.0且出现典型扩增曲线者判为PEDV核酸阳性，否则判为PEDV核酸阴性。

5疫苗免疫

5.1疫苗选择

选择与本地区或本场流行毒株同源性高的疫苗毒株，主要包括灭活疫苗和活疫苗。

5.2免疫程序

3

5.2.1常规免疫

免疫程序推荐如下：

a)后备母猪：配种前免疫2次，第一针选用活疫苗，间隔