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融合原生质体筛选方法

一、基于遗传特性的筛选方法

抗性互补筛选法：

利用亲本原生质体对抗生素、除草剂及其他有毒物质的抗性差异来选择杂种细胞。

例如，将两种具有不同抗性的原生质体融合后，在含有特定抗生素的培养基上培养，只有融合子能够存活，从而可选择出杂种细胞。

营养缺陷型筛选法：

将亲本菌株诱变处理后产生对某些营养物质合成途径受阻的突变株。

在分离的培养基上，只有融合子（能够互补双方的营养缺陷）能够生长，而突变的双亲本原生质体则无法形成菌落。

荧光染色法筛选：

事先将双亲原生质体分别用不同荧光色素标记。

在显微操作器和荧光显微镜下，挑取同时带有双亲原生质体荧光标记的融合子进行培养。

灭活原生质体标记筛选：

在原生质体融合之前，对单亲或双亲原生质体进行灭活处理（如热灭活、紫外灭活或化学灭活），使其丧失再生的能力。

当与另一亲株融合后，由于代谢上的互补作用，融合子能够存活。

二、基于物理特性的筛选方法

大小、颜色、漂浮密度筛选：

利用亲本原生质体在大小、颜色、漂浮密度等方面的差异来筛选杂种细胞。

例如，通过显微镜观察或染色后观察，可以区分出融合子与双亲本细胞。

电泳迁移率筛选：

利用亲本原生质体在电场中的电泳迁移率差异来筛选杂种细胞。

这种方法需要特殊的电泳设备和操作技术。

三、基于生长特性的筛选方法

培养基成分与反应差异筛选：

利用原生质体对培养基成分要求与反应的差异性来选择杂种细胞。

例如，有些融合子可能具有不同于双亲本的生长特性（如对外源激素的依赖性、对特定营养物质的利用率等），从而可以在特定的培养基上被筛选出来。

愈伤组织形态及颜色差异筛选：

在植物原生质体融合中，可以利用愈伤组织的形态和颜色差异来选择杂种细胞。

例如，将融合后的原生质体培养在适当的培养基上，观察愈伤组织的形态和颜色变化，从而筛选出融合子。

四、其他筛选方法

递归融合与选择性压力筛选：

通过递归融合策略，在选择性培养压力条件下筛选出前一轮优良性状得到不同程度整合的融合子构成亲本库。

这些性状再通过下一轮的融合进一步整合，递归几轮后，原始亲本优良性状或代谢途径便可基本汇集在最后一轮的融合子中。

高通量筛选技术：

利用现代仪器装备进行高通量筛选，如孔板式微反应器、分体式微型生物反应器、微流控芯片系统等。

这些技术可以大大提高筛选效率和准确性，适用于大规模菌种筛选和基因组改组育种。

融合原生质体的筛选方法多种多样，可以根据具体的研究目的和实验条件选择合适的方法。