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银杏叶乙醇提取物对菜青虫的触杀和拒食活性

一、实验材料与方法

(1)实验材料包括银杏叶（GinkgobilobaL.）和菜青虫（PlutellaxylostellaL.）。银杏叶采自我国某地成熟银杏树，经烘干、粉碎后过60目筛，得到银杏叶粉末。菜青虫购自某农业科学研究所，饲养于室内恒温条件下，保持适宜的温度和湿度。实验前，将菜青虫放置于含有新鲜菜叶的培养皿中，饥饿处理24小时，以确保其活性。

(2)实验试剂主要有无水乙醇、蒸馏水、NaCl、HCl、NaOH等。无水乙醇用于提取银杏叶中的活性成分，蒸馏水用于配制实验溶液。NaCl、HCl、NaOH等用于调节实验溶液的pH值。实验过程中，严格控制试剂的浓度和用量，以确保实验结果的准确性。

(3)实验方法包括以下步骤：首先，称取一定量的银杏叶粉末，加入适量的无水乙醇，在超声条件下提取2小时。提取液经过滤、浓缩、结晶、干燥等步骤，得到银杏叶乙醇提取物。其次，将提取物用蒸馏水溶解，配制成不同浓度的实验溶液。最后，将菜青虫随机分为若干组，每组放置在含有不同浓度银杏叶乙醇提取物的培养皿中，观察菜青虫的触杀和拒食反应。实验过程中，记录菜青虫的死亡时间和拒食时间，以评估银杏叶乙醇提取物的触杀和拒食活性。实验重复3次，每次实验样本数量不少于30只，以确保实验数据的可靠性。

二、银杏叶乙醇提取物的制备与纯化

(1)银杏叶乙醇提取物的制备采用超声波辅助提取法。首先，将干燥的银杏叶粉末与无水乙醇按质量比1:10混合，在超声波辅助下提取2小时。提取过程中，温度控制在60℃，以促进有效成分的释放。提取液经过滤后，滤液在旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/10，得到浓缩提取物。

(2)提取物经浓缩后，采用大孔树脂纯化。将浓缩提取物溶解于适量蒸馏水中，通过装有D101型大孔树脂的层析柱。层析柱以蒸馏水为洗脱剂，流速控制在1mL/min。收集洗脱液，利用薄层色谱（TLC）检测，合并相同位置的洗脱液。最后，将合并的洗脱液在旋转蒸发仪中减压浓缩至干燥，得到纯化的银杏叶乙醇提取物。

(3)纯化后的提取物进行含量测定。采用高效液相色谱（HPLC）法测定提取物中主要活性成分银杏内酯A、B、C的含量。色谱柱为C18柱，流动相为乙腈-水（梯度洗脱），检测波长为230nm。实验结果显示，银杏内酯A、B、C的纯度分别为98.5%、96.3%、95.7%，符合实验要求。同时，对提取物进行抗氧化活性测定，结果表明其具有较强的自由基清除能力，IC50值为0.15mg/mL。

三、银杏叶乙醇提取物对菜青虫触杀活性的实验研究

(1)实验设计采用完全随机区组设计，将菜青虫分为若干组，每组设置不同浓度的银杏叶乙醇提取物处理。实验设置5个浓度梯度，分别为0.01、0.05、0.1、0.5、1.0mg/mL。每个浓度梯度设置3个重复，每个重复放置10只菜青虫。处理24小时后，观察并记录菜青虫的死亡情况。

(2)观察结果显示，随着银杏叶乙醇提取物浓度的增加，菜青虫的死亡率逐渐上升。在0.01mg/mL浓度下，菜青虫死亡率仅为10%，而在1.0mg/mL浓度下，菜青虫死亡率高达90%。这表明银杏叶乙醇提取物对菜青虫具有较强的触杀活性。

(3)对死亡菜青虫进行解剖观察，发现其体内器官出现明显病变，如肠道破损、肝脏肿大等。此外，通过电子显微镜观察，发现银杏叶乙醇提取物处理组的菜青虫体表出现明显的损伤，进一步证实了其触杀活性。实验结果表明，银杏叶乙醇提取物对菜青虫触杀活性显著，有望作为新型生物农药应用于农业生产。

四、银杏叶乙醇提取物对菜青虫拒食活性的实验研究

(1)拒食活性实验旨在评估银杏叶乙醇提取物对菜青虫取食行为的影响。实验设置与触杀活性实验相似，采用5个浓度梯度，分别为0.01、0.05、0.1、0.5、1.0mg/mL的银杏叶乙醇提取物处理组，以及未处理对照组。每组放置10只菜青虫，置于含有新鲜菜叶的培养皿中，记录24小时内菜青虫的取食量。

(2)实验结果显示，随着银杏叶乙醇提取物浓度的增加，菜青虫的取食量显著减少。在低浓度（0.01mg/mL）下，菜青虫的取食量与未处理对照组相比，下降约15%。而在高浓度（1.0mg/mL）下，菜青虫的取食量下降幅度高达70%。这表明银杏叶乙醇提取物能够有效抑制菜青虫的取食行为，表现出良好的拒食活性。

(3)对拒食活性进行统计分析，结果显示，银杏叶乙醇提取物的拒食活性与其浓度呈正相关。具体来说，浓度为0.01mg/mL时，拒食率约为20%；0.05mg/mL时，拒食率约为40%；0.1mg/mL时，拒食率约为60%；0.5mg/mL时，拒食率约为80%；1.0mg/mL时，拒食率高达90%。此外，通过观察菜青虫的行为变化，发现处理组菜青虫表现出明显的拒食反应，如取食次数减少、取