链球菌溶血素O真核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化.docxVIP

链球菌溶血素O真核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化

目录

链球菌溶血素O真核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化（1）．．．．．4

一、内容简述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

国内外研究现状及发展趋势．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

研究目的及内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

二、链球菌溶血素O基因的特点及克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

链球菌溶血素O基因的基本特点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

基因的克隆与扩增技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

引物设计与合成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

三、真核表达载体的选择及构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

真核表达载体的简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

表达载体的选择与改造．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

重组表达载体的构建流程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

重组载体的鉴定与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

四、重组蛋白的表达及检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

转染与表达细胞的准备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

重组蛋白的诱导表达．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

蛋白表达水平的检测与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

五、重组蛋白的纯化及活性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

纯化方法的选择及原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

纯化过程中的操作要点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

重组蛋白的活性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

六、实验结果分析与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

实验结果的分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

实验结果的讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

实验中的注意事项与问题解决方案．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

七、结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

研究结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

研究成果的意义与价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

未来研究展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

链球菌溶血素O真核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化（2）．．．．34

内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

1.1目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

1.2材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

1.3链球菌溶血素O的背景信息．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

1.4重组蛋白表达纯化的理论基础．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

真核表达载体的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

2.1选择合适的载体．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

2.2导入链球菌溶血素O基因序列．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

2.3优化启动子和终止子．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

2.4重组质粒的构建与鉴定．