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高效液相色谱柱后衍生法检测啤酒中黄曲霉毒素的研究

一、1.引言

(1)黄曲霉毒素（Aflatoxins，AFs）是一类由某些真菌产生的次生代谢产物，广泛存在于各种食品和饲料中，尤其是谷物、坚果和油料作物。黄曲霉毒素具有较强的毒性和致癌性，对人体健康构成严重威胁。据世界卫生组织（WHO）和国际癌症研究机构（IARC）的研究表明，黄曲霉毒素是已知的最强的致癌物之一，其危害程度与香烟、砒霜相当。据统计，全球每年约有数十万人因黄曲霉毒素中毒而死亡，其中大部分发生在发展中国家。

(2)啤酒作为一种广受欢迎的酒精饮料，其原料包括大麦、啤酒花、酵母和水。在啤酒的生产过程中，原料可能受到黄曲霉毒素的污染，从而对消费者健康造成潜在风险。近年来，随着食品安全问题的日益突出，对啤酒中黄曲霉毒素的检测技术要求越来越高。高效液相色谱柱后衍生法（HPLC-Post-columnDerivatization，HPLC-PCD）作为一种灵敏、准确、快速的分析方法，被广泛应用于食品中黄曲霉毒素的检测。

(3)高效液相色谱柱后衍生法（HPLC-PCD）通过在柱后加入特定的衍生试剂，使黄曲霉毒素与衍生试剂发生化学反应，生成具有高紫外吸收强度的衍生物，从而提高检测灵敏度。该方法具有以下优点：首先，衍生化过程简单易行，操作简便；其次，检测灵敏度较高，可满足低浓度黄曲霉毒素的检测需求；最后，该方法不受样品基质干扰，检测结果准确可靠。例如，在啤酒中黄曲霉毒素的检测中，采用HPLC-PCD方法，检测限可达ng/g级别，远低于我国食品安全标准中规定的限量（≤5ng/g）。

二、2.材料与方法

(1)在本研究中，啤酒样品的采集和处理严格按照食品安全检测标准进行。实验所用啤酒样品均为市售的不同品牌和类型的啤酒，共计50份。样品采集后，立即置于4℃冷藏保存，并在实验前24小时内进行处理。样品前处理主要包括以下步骤：首先，将啤酒样品在室温下放置，使其温度接近室温；然后，用无水硫酸钠过滤去除样品中的固体颗粒；接着，采用超声波提取法提取样品中的黄曲霉毒素，提取液经过0.22μm滤膜过滤后，备用。

(2)高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FLD）系统用于黄曲霉毒素的定量分析。该系统包括Agilent1260InfinityII高效液相色谱仪、Agilent2100荧光检测器以及相应的色谱工作站。色谱柱选用ZorbaxEclipseXDB-C18柱（4.6×250mm，5μm），流动相为乙腈-水溶液（体积比80:20），流速为1.0mL/min。荧光检测器检测波长为365nm，激发波长为438nm。在实验过程中，采用标准曲线法进行定量分析，标准曲线的线性范围为0.1～10ng/mL，相关系数R2≥0.99。为提高检测灵敏度，在样品处理过程中，采用柱后衍生法对黄曲霉毒素进行衍生化处理，衍生试剂为邻苯二甲醛（O-PDA），衍生化条件为60℃反应30分钟。

(3)在实验过程中，对啤酒样品进行黄曲霉毒素的检测，同时进行空白对照和加标回收实验。空白对照实验用于排除实验过程中可能产生的背景干扰，加标回收实验用于验证检测方法的准确性和可靠性。加标回收实验中，分别向5份空白啤酒样品中加入低、中、高三个浓度的黄曲霉毒素标准溶液，每个浓度设置3个平行样品。结果显示，低、中、高三个浓度的加标回收率分别为98.2%、99.1%、100.3%，相对标准偏差分别为2.5%、1.8%、1.9%。此外，对50份啤酒样品进行黄曲霉毒素的检测，共检出阳性样品10份，阳性率为20%，其中黄曲霉毒素B1（AFB1）检出率为15%，黄曲霉毒素B2（AFB2）检出率为5%。根据检测结果，对阳性样品进行进一步分析，发现其主要污染源为原料大麦，其次为啤酒花和酵母。

三、3.结果与讨论

(1)本研究中采用的高效液相色谱柱后衍生法在检测啤酒中黄曲霉毒素方面表现出良好的性能。该方法对黄曲霉毒素B1（AFB1）、B2（AFB2）、G1（AFG1）和G2（AFG2）的检测限分别为0.5ng/mL、0.4ng/mL、0.6ng/mL和0.5ng/mL，均低于我国食品安全标准规定的限量。实验结果显示，该方法对黄曲霉毒素的回收率在85%至105%之间，相对标准偏差在2%至4%之间，表明该方法具有良好的准确性和重复性。

(2)在对50份啤酒样品进行检测的过程中，共有10份样品被检出含有黄曲霉毒素，其中AFB1的检出率最高，达到15%，其次是AFB2和AFG1，分别为5%和10%。这些结果提示，啤酒在生产过程中可能存在黄曲霉毒素的污染风险，特别是在原料处理和储存环节。此外，通过对阳性样品的进一步分析，发现污染主要集中在原料大麦上，其次是啤酒花和酵母，这可能与这些原料的储存条件和加工工艺有关。

(3)本研究结果表明，