《目的基因获取》课件.pptVIP

*****************课程大纲什么是目的基因?了解目的基因的定义、特点和重要性。获取目的基因的方法探索各种目的基因获取技术，包括克隆、合成、修饰等。应用实例学习目的基因获取技术在生物医药、农业、环境等领域的应用案例。未来发展趋势展望目的基因获取技术未来的发展方向和挑战。什么是目的基因?1特定功能一个目的基因通常是指编码一种特定蛋白质或RNA的DNA片段。2研究目标研究人员通过克隆和表达目的基因，来了解基因的功能，开发药物或其他产品。3生物体特征目的基因决定了生物体的某些特性，例如颜色、大小、疾病抗性等。目的基因的重要性生物学研究基础目的基因是揭示生命奥秘的关键，提供遗传信息，驱动生物体发育和功能。生物技术应用目的基因是生物技术的基础，用于改造生物体，生产药物和农作物，改善人类生活。医学和农业目的基因在医疗领域应用广泛，用于诊断和治疗疾病，在农业中用于提高产量和抗逆性。获取目的基因的方法1基因组文库法构建基因组文库，将目标基因片段克隆到载体上，形成克隆库，进行筛选。2cDNA文库法从目标组织中提取mRNA，逆转录成cDNA，构建cDNA文库，进行筛选。3PCR扩增法利用PCR技术根据已知目的基因序列设计引物，扩增目标基因片段，再将其克隆到载体上。4合成基因法根据目的基因的序列人工合成基因，并将其克隆到载体上。限制酶切割DNA片段1识别特定序列限制酶识别并结合DNA分子上的特定核苷酸序列。2切割DNA链限制酶在识别序列内或附近切割DNA双链。3产生粘性末端许多限制酶在切割后产生具有互补碱基序列的“粘性末端”。4连接片段粘性末端可以与其他具有互补序列的DNA片段配对。通过这种方式，限制酶可以用来从较大DNA分子中切割出目的基因片段，并在后续步骤中将这些片段与载体DNA连接。连接片段到载体DNA限制酶消化使用与目的基因和载体相同的限制酶进行消化，产生互补的粘性末端。连接反应在DNA连接酶的作用下，目的基因片段和载体DNA的粘性末端连接，形成重组DNA分子。连接产物分析使用琼脂糖凝胶电泳等方法对连接产物进行分析，确认重组DNA分子是否形成。转化受体细胞1制备感受态细胞通过化学或物理方法处理细菌，使其处于可接受外源DNA的状态。2转化将重组载体与感受态细胞混合，使载体进入细胞。3筛选通过抗生素抗性或其他标记基因，筛选成功转化的细胞。转化是基因工程中必不可少的一步，使重组载体进入受体细胞，并使其表达目的基因。制备感受态细胞是保证转化效率的关键步骤，不同的细菌需要不同的方法处理。筛选和鉴定目的基因转化子筛选使用抗生素抗性基因筛选转化子，确保目的基因成功整合到细菌基因组中。基因检测利用PCR或Southernblot技术验证目的基因是否插入到受体细胞中。目的基因表达通过RT-PCR或Westernblot等方法检测目的基因是否表达，以及表达产物的正确性。功能验证在体外或体内系统中评估目的基因的生物学功能，验证其是否正常发挥作用。体外表达和纯化目的蛋白1蛋白表达将目的基因插入表达载体，然后转化到宿主细胞中，进行表达。2细胞裂解利用适当的试剂或方法，将表达目的蛋白的细胞破碎，释放蛋白。3蛋白纯化利用不同的层析方法，例如亲和层析，分离纯化出目的蛋白。4鉴定和分析对纯化的蛋白进行鉴定，确认其性质和功能。体外表达和纯化目的蛋白是基因工程中重要的一环。通过将目的基因导入宿主细胞并进行表达，可以获得大量目的蛋白，用于研究或生产。应用实例1:胰岛素基因克隆胰岛素基因克隆是第一个成功的基因工程应用，它为治疗糖尿病患者提供了新的方法。通过将人类胰岛素基因插入细菌中，科学家们成功地利用细菌生产出大量的胰岛素，为糖尿病患者提供了可负担得起的治疗选择。胰岛素基因克隆的成功不仅开创了基因工程应用的先河，也为现代生物技术的发展奠定了基础。它证明了基因工程可以被用来生产有价值的蛋白质和药物，为解决人类疾病和提高生活质量提供了新的途径。应用实例2:抗生素合成基因工程抗生素合成基因工程是将抗生素合成基因克隆到宿主细胞中，利用宿主细胞的蛋白表达系统生产抗生素。该技术可提高抗生素产量，降低生产成本，并可开发新型抗生素，以对抗日益严重的耐药性问题。应用实例3:人源化单抗的制备人源化单抗是通过基因工程技术将小鼠单克隆抗体的抗原结合部位移植到人抗体骨架上，从而降低其免疫原性，提高其在人体内的安全性。人源化单抗在治疗肿瘤、自身免疫性疾病等方面具有广阔的应用前景，其制备过程涉及目的基因的获取、克隆和表达等多个步骤。