转基因动物及克隆动物.ppt

（三）胚胎干细胞介导法（ES细胞法）关于ES细胞胚胎干细胞（embryonicstemcell，ES）人或动物的胚胎中均存在一些具有高度更新能力和多向分化能力但尚未分化的干细胞，称胚胎干细胞。它与早期胚胎聚集，或被注射到胚胎后，能参与宿主胚胎的发育，形成包括生殖细胞在内的所有组织。原理将外源目的基因导入ES细胞，再移入胚泡期的宿主胚胎，最后将宿主胚胎移植到假孕母鼠子宫内，便可获得由胚胎干细胞介导的转基因动物。关键步骤ES细胞的分离培养ES细胞基因操作电穿孔、显微注射、磷酸钙-DNA共沉淀、逆转录病毒感染等方法获取囊胚期胚胎显微操作ES细胞注射到囊胚期胚胎内胚胎移植三种转基因方法优缺点比较显微注射法23%Option1优点：缺点：整合率随机有些动物原核看不清，需经特殊处理才能有效导入需较精密仪器，费用昂贵整合率相对较高可导入基因片断较长外源基因整合于所有的组织细胞中的概率高30%Option2逆转录病毒法01胚胎存活率高病毒DNA随机单拷贝整合宿主范围广优点：02整合率不高，整合位点是随机的后代多为嵌合体动物外源基因易发生重排或丢失病毒载体容量不大病毒DNA序列可能会干扰外源基因的表达缺点：ES细胞法缺点：ES细胞系培养、保存和维持不易后代多为嵌合体所需时间较长优点：整合率可控可用多种方法将外源基因导入ES细胞，其细胞的鉴定和筛选比较方便ES细胞注入囊胚及囊胚移植到子宫，操作比较简便五、转基因关键技术外源目的基因的制备01外源目的基因的有效导入02受精卵（胚胎）培养与移植03外源目的基因表达的检测等04六、应用价值研究基因的结构和功能及其表达与调控建立人类疾病动物模型研究人类疾病基因治疗?研制生物反应器扩大移植供体来源改良动物品种?Geneknockout(基因敲除)：是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将该基因去除，或用其它顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动物，推测相应基因的功能。研究基因的结构和功能及其表达与调控2、动物疾病模型其中开发最成功的是转基因小鼠200多种动物模型建立（病毒、遗传、肿癌及眼疾病等）800余种人为改造小鼠产生HBV转基因动物树鼩3.基因治疗（genetherapy）转基因动物为人类疾病基因治疗提供了良好的实验依据和模型指将外源功能性目的基因导入病人体内，通过调控目的基因表达，抑制、替代或补偿缺陷基因，从而恢复受累细胞、组织或器官的生理功能，达到疾病治疗目的的一种方法。4、研制生物反应器生物反应器：将药用蛋白或具有特殊意义的蛋白质基因导入动物的受精卵或早期胚胎，培育成转基因动物，使之在动物体内（如乳腺、血液等）高效表达，生产出天然活性蛋白，这种转基因动物就称之为动物生物反应器优势目标产品产量高，容易收获目标产品质量好生产成本相对较低目标产品的提取相对较容易主要动物01添加标题牛、羊、猪、鸡02添加标题主要靶器容03添加标题乳腺、血液系统、膀胱及鸡输卵管系统单击此处可添加副标题用动物乳腺表达外源基因的主要种类产品类别举例血液产品第8因子、第9因子、C蛋白、凝血酶III、抗胰蛋白酶、血纤蛋白原抗体单克隆抗体药物干扰素、人生长激素、tPA、EPO疫苗Malaria组织维生物Collagen营养药乳白蛋白、乳铁蛋白、溶菌酶、人源化牛奶工业蛋白质蜘蛛网蛋白、贝类分泌的黏蛋白单击此处添加大标题内容我国乳腺生物反应器研究情况目的基因名称产品的主要功能承担单位人血清白蛋白血液溶胀剂中国农业大学人干扰素抗病毒因子中国农业大学鸡法氏囊病毒VP鸡疫苗中国农业大学第九因子血友病治疗上海儿童医院EPO细胞因子