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PI3-K的激活在TGF-β1诱导GMC基质分泌过程中的作用--第1页
２００７年ｌ１月第４５卷第２Ｏ期・论著・
ＰＩ３－Ｋ的激活在ＴＧＦ－１３诱导ＧＭＣ基质分泌过程中的作用
郭舒羽－指导教师高龄娟ｚ
（１．南方医科大学第一临床医学院２００５级；２．南方医科大学微生物免疫教研室，广州５１０５１５）
摘要】目的探讨磷脂酰肌醇３一激酶的激活在转化生长因子ｐ体外诱导人肾小球系膜细胞基质过度分泌中的作用及意【
义。方法ＧＭＣｓ体外培养，刺激ｌｈ后检测ｐ－Ａｋｔ及总Ａｋｔ水平，４８ｈ检测ＦＮ的表达。结果Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，加入
ＴＧＦ—Ｂ刺激后磷酸化Ａｋｔ水平显著升高，并且随着ＴＧＦ—ｐ浓度升高而增加，人ＧＭＣｓ中ｐ－Ａｋｔ水平也逐渐升高，同时加
入等浓度的Ｗｏｒｍａｔｎｎｉｎ（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）后，磷酸化Ａｋｔ水平较单纯加入ＴＧＦ—Ｂ显著减弱，且差异有显著性（Ｐ＜０．０５），但与
正常对照组比较差异无显著陛Ｐ（＞４０５），刺激ＧＭＣｓ２４ｈ，ＴＧＦ—ｐ刺激组蛋白质ＧＭＣｓ分泌的ＦＮ量明显增加。结论ＰＩ３一Ｋ也
可被ＴＧＦ—ｐ。激活，并且在由ＴＧＦ—ｐ所引起的ＧＭＣｓ基质过度分泌过程中发挥重要作用。
关键词［】肾小球系膜细胞；转化生长因子ｐ；磷脂酰肌醇３一激酶；蛋白激酶Ｂ／Ａｋｔ
中【图分类号】Ｒ３９２．１１文献标识码［】Ａ【文章编号】１６７３—９７０１（２００７）２０—１５—０２
转化生长因子ｐｌ（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｐｒ１，ＴＧＦ—ｐ１）波长５９５ｎｍ，紫外分光光度计测吸光度，以标准牛血清白蛋白为
引起的肾小球系膜细胞（ＧＭＣｓ）基质过度分泌是导致肾小球纤维标准作曲线。取相同总量总蛋白（２ｘｇｉ）ｌ￣各样本，加入适量体积
化的主要原因】『１。磷脂酰肌醇３—激酶（Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ３－ｋ一ｉ的５Ｘ上样缓冲液，ｌＯＯＴ：变性５ｍｉｎ，然后进行１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
／ｌａｓｅ，ＰＩ３一Ｋ）是生长因子受体超家族信号转导过程中重要的一电泳，ＰＶＤＦ膜转印１ｈ，行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ免疫印迹。以５％脱脂奶
员，在体内ＰＩ３一Ｋ通过磷酸化磷酸肌醇４，５一二磷酸（ＰＩＰ２）成为粉封闭ｌｈ，分别加入一抗（１：１０００）４￣Ｃ过夜，二抗为辣根过氧化
第二信使磷脂酰肌醇一３，４，５一三磷酸（ＰＩＰ３），从而引起一系列物标记的山羊抗鼠抗体（１：２０００），采用ＤＡＢ显色法显色；凝胶
的细胞因子激活或抑制，这其中最重要的是蛋白激酶Ｂ／Ａｋｔ成像系统扫描分析，蛋白含量以积分光密度（Ｉｎｔｅｇｒａｌｏｐｔｉｃａｌｄｅｎ—
（ＰｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＢ／Ａｋｔ），ＰＩ３一Ｋ／Ａｋｔ在正常细胞增殖、分化、新陈ｓｉｔｙ，ＩＯＤ）表示，磷酸化Ａｋｔ水平用磷酸化Ａｋｔ与总Ａｋｔ水平的比
代谢及凋亡过程中起着重要作用，并且参与多种细胞因子的致值表示。实验重复３次。
纤维化过程１２１，但其是否也参与ＴＧＦ—Ｂ介导的ＧＭＣｓ基质过度１．３统计学处理
分泌目前还未见报道。为此，我院利用体外实验研究ＰＩ３一Ｋ与数据用（
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