环境浓度下磺胺类药物对斑马鱼早期发育毒性和神经行为机制影响的研究.pdfVIP

摘要

抗生素由于其稳定性和释放后的抗降解性，可以长期存在于自然界中，对环境及

相关生物产生影响。然而，环境浓度下抗生素毒性的分子机制，特别是磺胺类药物

sulfonamides,SAsenvironmentrelevant

（）的潜在神经毒性仍不清楚。环境浓度下（

concentrations,ERCs）的SAs对动物模型的生理、行为和机制影响是目前探索人类发育

疾病和神经行为影响因素的关键技术，动物神经行为研究方法的出现使人类对抗生素

影响神经行为的探索进入了新的研究时代。斑马鱼模型在行为分析中，可以基于简单

的行为端点，以各种深入的运动模式，灵敏、快速地评估多种化合物的毒性，可通过

毒理学实验和神经行为学研究，揭示发育过程中应激调节的潜在机制和高通量行为测

试。本研究搜集环境浓度下SAs的污染浓度，利用毒理学、行为学、机制研究等方法，

分析评估了6种SAs对斑马鱼发育毒性和神经行为的影响，为SAs对宿主发育的神经

行为的调控机制研究做了充分的准备。本实验主要内容如下：

(1)SAs环境浓度的调查和选择

目的：了解SAs环境条件下的污染浓度选择合适的实验浓度。方法：输入磺胺类

抗生素、河流污染、抗生素污染等词语，在中国知网（CNKI）、WebofScience(SCI)、

NationalCenterforBiotechnologyInformation(NCBI)以及其他网站查询SAs环境污染的

相关论文进行搜集和整理。结果：发现几十种SAs存在于环境中，其中农业废水、垃

圾场地下入渗水和生活污水中SAs的浓度主要在ng/L-mg/L之间，而排放河流中的浓

ng/L-μg/L6SAs,sulfadiazine,

度维持在。结论：确定实验使用种分别为：磺胺嘧啶（

SD）、磺胺噻唑(sulfathiazole,ST)、磺胺甲恶唑（sulfamethoxazole,SMX）、磺胺异恶唑

（sulfisoxazole,SIZ）、磺胺吡啶（sulfapyridine,SPD）、磺胺二甲氧嘧啶

（sulfadimethoxine,SDM）和3个实验浓度（0.05、5和500μg/L）对斑马鱼进行试验。

(2)SAs对斑马鱼的发育毒性实验

目的：观察SAs在环境浓度下对斑马鱼的形态学、器官发育等基础生理数据的影

hourspost-fertilization,hpf8hpf24hpf48hpf72hpf

响。方法：分别在受精后（）、、、、

96hpf、120hpf用体视显微镜进行数据采集，在8hpf时记录死亡和卵黄水肿个数，24

I

hpf记录死亡、无尾伸展个数和30s内自主运动次数，48hpf记录死亡、凝血个数和10

s内心跳次数，72hpf记录死亡个数，96hpf计算并观察各个样本的总存活率、总死亡

率和总畸形率，其中畸形形态主要记录：心包水肿、轴畸形、鱼鳔缺失等异常形态，

120hpf时每个样本随机选20枚记录体长数据和每个样本30枚的总体重数据，然后进

行样本收集处理。结论：SAs在环境浓度下可导致斑马鱼发生不同程度的畸形现象，

与对照组相比实验组斑马鱼的24hpf自主运动次数下降，48hpf心率降低，96hpf存活

率降低，畸形率升高，120hpf体长降低，体重降低。并且随着浓度的升高这些现象更

加明显。

(3)SAs对斑马鱼的行为学影响

目的：观察SAs在环境浓度下主要通过那些方面对斑马鱼行为学产生影响的，并

判断该行为会产生什么样的结果。方法：利用DanioVision™仪器记录120hpf的对照

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