DB50T 952-2019 动物组织中赭曲霉毒素a的测定 高效液相色谱法和液相色谱串联质谱法　　.docxVIP

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DB50

重庆市地方标准DB50/T952—2019

动物组织中赭曲霉毒素A的测定高效液相

色谱法和液相色谱串联质谱法

DeterminationofochratoxinAinanimaltissuesHPLCandLC-MS/MS

2019-12-15发布2020-03-15实施

重庆市市场监督管理局发布

I

DB50/T952-2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由重庆市农业农村委员会提出并归口。

本标准起草单位：重庆市动物疫病预防控制中心、重庆市兽药饲料检测所。

本标准主要起草人员：侯亚莉、周莉、李玉平、朱英才、盛欣、胡健、张毅、丁平、范首君、何义刚等。

II

DB50/T952-2019动物组织中赭曲霉毒素A的测定高效液相色谱法和液相色谱串联

质谱法

1范围

本标准规定了动物组织中赭曲霉毒素A的测定方法。

本标准适用于动物肾脏、肝脏、肌肉组织中赭曲霉毒素A的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文本的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用本文件。

GB/T6628分析实验室用水规格和试验方法

3高效液相色谱法3.1方法原理

用提取液提取试样中的赭曲霉毒素A，经免疫亲和柱净化后，采用高效液相色谱结合荧光检测器测定赭曲霉毒素A的含量，外标法定量。

3.2试剂和材料

3.2.1水为符合GB/T6682规定的一级水。

3.2.2乙酸乙酯：分析纯。3.2.3磷酸：分析纯。。

3.2.4碳酸氢钠：分析纯。3.2.5乙酸铵：分析纯

3.2.6甲醇：色谱纯。3.2.7乙腈：色谱纯

3.2.81mol/L磷酸溶液：称取磷酸115.3g，用水溶解并稀释至1000mL。

3.2.90.05mol/L碳酸氢钠溶液：称取碳酸氢钠21g，用水溶解并稀释至500mL。3.2.10赭曲霉毒素A标准品：纯度大于99﹪。

3.2.11赭曲霉毒素A标准储备溶液：精确称取标准品0.0100g（精确至0.0001g），置于10mL棕色

容量瓶中，用甲醇定容，得浓度为1mg/mL的标准储备溶液。2℃~8℃保质期3个月。

3.2.12赭曲霉毒素A标准中间溶液：准确移取标准储备溶液1mL，置于10mL棕色容量瓶中，用甲

醇定容至刻度，标准品浓度为0.1mg/mL。2℃~8℃保质期1周。

3.2.13赭曲霉毒素A标准工作溶液：准确移取赭曲霉毒素A标准中间溶液适量，用乙腈—水溶液

（55+45，体积比）配制成浓度为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL和10ng/mL的标准工作溶液。现用现配。

3.2.14淋洗缓冲液：称取12.5g氯化钠、5g碳酸氢钠溶于水中，加入0.1mL吐温-20，用水稀释至

1000mL。

3.2.15洗脱液：甲醇—乙酸溶液（49+1），量取490mL和10mL的乙酸，混匀。

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DB50/T952-2019

3.2.16微孔滤膜：0.22μm，有机系。

3.2.17赭曲霉毒素A免疫亲和柱：规格3mL，柱容量≥100ng，或等效柱。3.3仪器和设备

3.3.1分析天平：感量0.1mg，0.01mg。3.3.2液相色谱仪：配荧光检测器。

3.3.3组织捣碎机。3.3.4旋涡混匀器。3.3.5氮吹仪。

3.3.6振荡器。

3.3.7离心机：转速不低于5000r/min3.3.8PH计：精度为0.01。

3.4试样的制备与保存

取代表性样约100g，用组织捣碎机捣碎，装入试样袋，密封并做好标识，于-20℃下保存。

3.5提取与净化3.5.1样品的提取

准确称取待测样品2g（精确至0.001g），置于50mL离心试管中，加0.6mL磷酸溶液（3.2.8），涡旋混匀，放置15min后，加入5ml乙酸乙酯提取，涡动3分钟，4000rpm离心5分钟，将上清液转入另一个50mL离心管中。重复提取3次，合并3次上清液。上清液加入5mL的碳酸氢钠溶液（3.2.9）涡动3分钟，4000rpm离心5分钟，收集碳酸氢钠溶液层，