DB22T 1609-2012 动物尿液中β-受体激动剂测定酶联免疫法　.docxVIP

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备案号：35743-2013DB22吉林省地方标准

DB22/T1609—2012

动物尿液中β-受体激动剂测定酶联免疫法

Determinationofβ-Agonistsinanimalurine——Enzymelinkdeimmunosorbentassay

2012-12-01发布2013-01-01实施

吉林省质量技术监督局发布

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DB22/T1609—2012

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心、珲春出入境检验检疫局、白城出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：胡婷婷、李玲、张琦、杨帆、张勋、杨璐、冯博。

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DB22/T1609—2012

动物尿液中β-受体激动剂测定酶联免疫法

1范围

本标准规定了动物尿液中β-受体激动剂残留量的酶联免疫测定方法。

本标准适用于动物尿液中克伦特罗、沙丁胺醇、溴布特罗、马布特罗、马喷特罗、特布他林及卡布特罗残留定性的快速筛查。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3原理

检测的基础是抗原抗体反应，微孔板包被有针对沙丁胺醇抗体的捕获抗体。加入沙丁胺醇抗体后，会与捕获抗体结合。经过孵育及洗板步骤后，加入标准品、样品溶液及沙丁胺醇酶标记物（酶连接物），样品中的β-受体激动剂与沙丁胺醇酶连接物竞争沙丁胺醇抗体的连接位点（竞争性酶联免疫法）没有连接的沙丁胺醇酶连接物在洗涤步骤中被除去。将底物/发色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶连接物将发色剂转化为蓝色的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450nm处测量，吸光度值与样品中的β-受体激动剂浓度成反比。几种待测物交叉反应率应不低于50%。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1氢氧化钠（NaOH）。

4.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.3正己烷（C6H14）：色谱纯。4.4盐酸（HCl）。

4.5β-受体激动剂检测试剂盒：应在有效期内使用，保存于2℃~8℃。不同批次的试剂盒不可混用。

4.5.1β-受体激动剂系列标准溶液：浓度依试剂盒要求确定。4.5.2酶标板。

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DB22/T1609—2012

4.5.3抗体。

4.5.4酶标记物。

4.5.5底物/发色剂。

4.5.6反应终止液。

4.5.7样品稀释缓冲液。4.5.8洗涤缓冲液。

5仪器与设备

5.1酶标仪：配备450nm滤光片。

5.2微量加液器：单道20μL～200μL，200μL～1000μL微量加液器，多道50μL～250μL微量加液器。

5.3振荡器。

5.4涡旋振荡器。

5.5天平：感量为0.01g。5.6高速离心机。

6分析步骤

6.1试样处理

取20μL尿液样品直接进行检测，如果尿液混浊，试验前先进行离心或过滤。

6.2测定步骤

6.2.1制备酶标记物和抗体使用液：1：10稀释酶标记物和抗体，如取200μL酶标记物及2mL样品稀释缓冲液（4.5.7）稀释并混合均匀。

6.2.2依次向微孔中加入稀释后的酶标记物10μL，室温下孵育15min。

6.2.3倒出孔中液体，每孔加入洗涤缓冲液（4.5.8）250μL，弃去孔中液体，再将酶联板倒置在滤纸上拍打，重复洗板3次。

6.2.4加入标准溶液或试样溶液20μL，然后加入100μL稀释后的酶标记物（6.2.1），用手轻摇微孔板混合，在室温（20℃~25℃)孵育30min。

6.2.5弃去孔中液体，将酶联板倒置在吸水纸上拍打，使孔内没有残余液体。每孔加入洗涤缓冲液（4.5.8）250μL，弃去孔中液体，再将酶联板倒置在吸水纸上拍打，重复洗板3次。

6.2.6加入100μL底物/发色剂（4.5.5）到各微孔中，用手轻轻摇动微孔板混合，在室温