DB21T 2323-2014 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒RT-PCR检测方法.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB21

辽宁省地方标准

21/T23232014

DB—

亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒RT-PCR检测方法

MethodofRT-PCRforthedetectionoftypeAsia1footandmouthdiseasevirus

2014-07-05发布2014-09-05实施

辽宁省质量技术监督局发布

DB21/T2323—2014

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。

本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。

本标准起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。

本标准主要起草人：杨本勇、曹东、李井春、王宏燕、李树博、段亚良、刘坤洋、何利昆、王军、丁静、

张鑫、王芬、王海波

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DB21/T2323—2014

亚洲I型口蹄疫病毒RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了亚洲I型口蹄疫病毒（FMDV-AsiaI）RT-PCR检测方法的实验材料、仪器设备、试剂、

操作步骤和结果判定，并介绍了其原理。

本标准适用于动物及动物产品中亚洲I型口蹄疫病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

分析实验室用水规格和试验方法

兽医实验室生物安全技术管理规范

3缩略语

下列缩略语适用于本标准。

DEPC（diethypyocarbonate）焦炭酸二乙酯

RNA(ribonucleicacid)核糖核酸

RT-PCR(reversetranscription-PCR)反转录聚合酶链反应

dNTP(deoxy-ribonucleosidetriphosphate)脱氧核苷酸三磷酸

bp(basepair)碱基对

O-P液(oesophagus-pharyngeal)牛、羊食道-咽部分泌物

EB（Ethidiumbromide）溴化乙锭

FMDV-AsiaI（Foot-and-mouthdiseasevirusserotypeAsiaI）亚洲I型口蹄疫病毒

4原理

FMDV是一种RNA病毒。RNA反转录产生的cDNA可作为PCR模板进行扩增。根据FMDV-AsiaI保

守基因序列设计一对引物，在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以引物为延伸起点，通过变

性、退火和延伸，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA。

5实验材料、仪器设备和试剂

5.1实验材料

眼科剪、眼科镊、称量纸、1.5mL灭菌离心管（经DEPC水处理）、0.2mL薄壁PCR管、50