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全自动固相萃取-高效液相色谱法测定食品中红曲色素

一、1.背景与意义

(1)红曲色素作为一种天然着色剂，广泛应用于食品、药品和化妆品等领域。其安全性高、色泽鲜艳、稳定性好，深受消费者和制造商的青睐。随着人们对食品安全和健康意识的不断提高，对食品中红曲色素的检测要求也越来越严格。据统计，全球红曲色素市场规模已超过10亿美元，且每年以约5%的速度增长。因此，建立一种快速、准确、高效的检测方法对于确保食品安全和推动红曲色素产业的健康发展具有重要意义。

(2)红曲色素的检测方法主要包括比色法、高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱联用法（LC-MS）等。其中，HPLC因其分离效率高、灵敏度高、样品用量少等优点，被广泛应用于红曲色素的定量分析。近年来，随着自动化技术的进步，全自动固相萃取（SPE）技术逐渐成为HPLC检测的前处理手段，能够有效提高样品前处理效率，降低操作难度，减少人为误差。

(3)食品中红曲色素的污染问题日益突出，如2011年发生的“染色馒头”事件，就是由于部分不法商家在馒头中添加了非食用色素，严重危害了消费者的健康。因此，加强对食品中红曲色素的检测，对于维护消费者权益、保障食品安全具有至关重要的意义。根据我国相关法规，食品中红曲色素的限量标准为每千克食品中含量不超过0.5克。因此，建立一种准确、可靠的检测方法对于监控食品中红曲色素含量，确保其符合国家标准具有重要意义。

二、2.方法与原理

(1)全自动固相萃取-高效液相色谱法（Auto-SPE-HPLC）是一种高效、便捷的样品前处理和分离分析方法，广泛应用于食品、药品和环境样品中的污染物检测。该方法结合了全自动固相萃取技术的高效样品净化和HPLC的高分离效能，能够显著提高检测效率和分析质量。在食品中红曲色素的测定中，Auto-SPE-HPLC能够实现样品的快速、准确分离和定量。

具体操作中，样品首先通过固相萃取柱进行富集和净化，利用特定的吸附剂对红曲色素进行选择性吸附，同时去除样品中的杂质和干扰物质。根据红曲色素的物理化学性质，通常选择C18、C8或反相硅胶作为固相萃取柱的吸附剂。经过适当的洗脱步骤，红曲色素从吸附剂上被洗脱下来，进入HPLC进行分析。

(2)高效液相色谱法（HPLC）是基于液-液分配原理的色谱分离技术，其基本原理是利用不同组分在固定相和流动相之间的分配系数差异，通过流动相携带样品在固定相上移动，从而达到分离目的。在红曲色素的测定中，通常采用紫外检测器（UV）或荧光检测器（FLD）进行检测。以UV检测为例，红曲色素在特定波长下有较强的吸收，通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以实现对红曲色素的定量分析。

HPLC系统的组成包括输液泵、色谱柱、检测器、柱温箱和数据处理系统等。在实际操作中，通过优化流动相组成、流速、柱温等参数，可以显著提高分离效果和检测灵敏度。例如，在红曲色素的测定中，流动相通常为甲醇-水或乙腈-水，流速控制在1.0-1.5mL/min之间，柱温设定在室温或略高于室温。

(3)为了提高检测灵敏度和准确性，常常需要结合柱切换或梯度洗脱等技术。柱切换技术能够在同一色谱柱上实现两种不同流动相的切换，从而实现样品的快速分离和检测。在红曲色素的测定中，可以先使用一种流动相进行初步分离，然后切换到另一种流动相进行进一步分离和检测。梯度洗脱技术则是通过改变流动相的组成比例，实现样品的快速分离和检测。例如，可以先使用高比例有机相进行洗脱，随后逐渐降低有机相比例，使红曲色素得到更全面的分离。这些技术的应用，使得红曲色素的测定不仅具有较高的灵敏度和准确性，还能够满足复杂样品的分析需求。

三、3.实验部分

(1)实验所用样品为市售红曲米制品，包括红曲米酒、红曲糖果和红曲酱油等。首先，将样品进行混合均匀，然后准确称取一定量的样品粉末，加入适量的提取溶剂（如甲醇或乙腈）进行超声提取。提取完成后，将提取液通过0.45μm的滤膜过滤，以确保后续分析过程的顺利进行。

(2)在全自动固相萃取系统中，将处理后的样品溶液上样至预先平衡好的固相萃取柱上。根据样品中红曲色素的吸附特性，选择合适的固相萃取柱，如C18或C8。上样后，使用适量的洗脱液（如水或缓冲溶液）进行洗脱，以确保红曲色素的有效回收。洗脱液通过固相萃取柱收集，并在适当的条件下进行浓缩和定容，以便后续的高效液相色谱分析。

(3)高效液相色谱分析采用梯度洗脱模式，流动相为甲醇-水或乙腈-水，流速设定为1.0mL/min。色谱柱选用C18或C8，柱温控制在室温或略高于室温。紫外检测器（UV）的检测波长设定为520nm，荧光检测器（FLD）的激发和发射波长分别设定为520nm和580nm。通过优化流动相组成、流速、柱温等参数，实现对红曲色素的高效分离和定量。例如，在一项实验中，使