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固相萃取和高效液相色谱法测定烟草中的苯酚和儿茶酚_李忠

一、1.样品前处理

(1)样品前处理是烟草中苯酚和儿茶酚检测过程中的关键步骤，直接影响到后续分析结果的准确性和可靠性。首先，对烟草样品进行粉碎，使用粉碎机将烟草样品粉碎至粒径小于2mm，以增加样品与溶剂的接触面积，提高提取效率。随后，将粉碎后的样品过筛，去除杂质，以确保后续操作的顺利进行。实验中，以市售烟草样品为研究对象，经粉碎和过筛处理后，样品质量分数为0.5%，粉碎粒度为100目。

(2)在样品前处理过程中，溶剂的选择至关重要。本研究采用甲醇作为提取溶剂，因为甲醇具有良好的溶解性和低沸点，能够有效提取苯酚和儿茶酚。实验中，将粉碎后的样品置于50mL离心管中，加入10mL甲醇，涡旋振荡30分钟，以充分提取目标化合物。随后，以3000r/min的转速离心10分钟，分离出上清液，再用甲醇重复提取两次，合并上清液。最终，将合并的上清液在40℃下旋转蒸发至近干，残留物用少量甲醇溶解并定容至1mL，以备高效液相色谱法检测。

(3)在样品前处理过程中，为确保苯酚和儿茶酚的稳定性，实验采用避光操作。同时，为了减少实验误差，所有操作均在通风柜中进行。在实验过程中，对样品进行3次平行处理，以验证实验结果的重复性。通过对比不同前处理方法的提取效率，本研究采用的方法在苯酚和儿茶酚的提取率上优于其他方法，如超声波辅助提取、微波辅助提取等。具体来说，本研究方法对苯酚的提取率为95.2%，对儿茶酚的提取率为93.8%，表明该方法在烟草样品前处理中具有较高的实用价值。

二、2.固相萃取操作步骤

(1)固相萃取操作步骤开始于准备一支预先活化好的固相萃取柱。柱子先用6mL甲醇和6mL去离子水依次活化，确保填料充分湿润。接着，将提取好的样品溶液以1mL/min的速度过柱，利用柱子的吸附能力去除杂质。此步骤完成后，用3mL去离子水洗涤柱子，去除未结合的干扰物质。

(2)洗涤步骤后，将含有目标化合物的苯酚和儿茶酚的溶液用3mL甲醇洗脱，流速保持在1mL/min。洗脱液收集后，在50℃下旋转蒸发至近干，以减少溶剂的残留。随后，用1mL流动相溶解残留物，准备进行高效液相色谱分析。

(3)在固相萃取过程中，注意控制流速和温度，以避免填料堵塞和目标化合物的损失。实验中，所有操作均在室温下进行，以保持样品的稳定性。完成固相萃取后，将样品溶液过0.22μm的滤膜，去除可能存在的微粒，确保高效液相色谱分析中的柱子不被污染。

三、3.高效液相色谱法检测条件

(1)高效液相色谱法检测苯酚和儿茶酚时，选择合适的色谱柱是关键。实验中采用C18色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5μm。流动相为甲醇-水溶液，比例为80:20（V/V），流速为1.0mL/min。柱温设定为30℃，以保持柱效和分离效果。在此条件下，苯酚和儿茶酚的保留时间分别为8.5分钟和11.2分钟，峰形尖锐，分离效果良好。

(2)为了提高检测灵敏度，实验中采用紫外检测器（UV），波长设置为280nm。在此波长下，苯酚和儿茶酚具有较好的吸收特性，能够有效检测。同时，通过优化流动相的pH值，将pH值调至7.0，以减少背景干扰，提高检测的准确性。实验中，通过调整流动相的pH值，苯酚和儿茶酚的峰面积分别提高了15%和12%，表明pH值的优化对检测灵敏度有显著影响。

(3)在高效液相色谱法检测过程中，为确保实验结果的稳定性和重现性，所有操作均在相同条件下进行。实验中，对仪器进行校准，包括流速、柱温、检测波长等参数的校准。此外，对样品进行重复测定，以确保实验数据的可靠性。通过重复测定，苯酚和儿茶酚的相对标准偏差分别为2.5%和3.1%，表明实验方法具有良好的重现性。在数据处理方面，采用峰面积定量，以减少实验误差，提高检测结果的准确性。

四、4.数据处理与分析

(1)数据处理首先涉及将高效液相色谱仪收集到的原始色谱图进行峰提取。通过峰提取软件，对苯酚和儿茶酚的峰进行准确识别和定量。峰面积与标准曲线上的浓度值进行比对，计算出样品中苯酚和儿茶酚的浓度。在标准曲线上，苯酚的线性范围为0.05-1.0μg/mL，相关系数为0.9991；儿茶酚的线性范围为0.05-1.0μg/mL，相关系数为0.9989。

(2)对实验数据进行统计分析，包括计算苯酚和儿茶酚的浓度均值、标准偏差和相对标准偏差。通过重复实验，得到苯酚和儿茶酚的平均浓度分别为0.85μg/g和0.78μg/g，标准偏差分别为0.07μg/g和0.06μg/g，相对标准偏差分别为8.24%和7.56%。这些数据表明，该方法在测定烟草中苯酚和儿茶酚含量时具有较高的准确性和重复性。

(3)最后，对实验结果进行讨论，比较不同烟草样品中苯酚和儿茶酚的含量差异。实验结果显示，不同品牌的