功能区隔与蛋白分选.ppt

五、外排作用组成型外排途径：由TGN区分泌囊泡向质膜运输，通过defaultpathway完成转运。更新膜蛋白和膜脂、形成ECM、营养成分或信号分子。调节型外排途径：如激素或酶储于分泌泡内，当细胞在受到胞外信号刺激时，分泌泡释放出去。Theconstitutiveandregulatedsecretorypathways第四节内质网Porter等于1945年发现于培养的小鼠成纤维细胞，因最初看到的是位于细胞质内部的网状结构，故名endoplasmicreticulum，ER。一、形态与组成约占细胞总膜面积的一半，是封闭的网络系统。分为RER和SER。RER呈扁平囊状，排列整齐，有核糖体附着。SER呈分支管状或小泡状，无核糖体附着。细胞不含纯粹的RER或SER，它们分别是ER连续结构的一部分。RERSER膜含60%的蛋白和40%的脂类，PC含量较高，SM含量较少，没有或很少含胆固醇。约30多种膜结合蛋白，另有30多种位于ER网腔。葡糖-6-磷酸酶是ER标志酶，核糖体结合糖蛋白（ribophorin）只分布在RER，P450酶系只分布在SER。二、ER的功能蛋白质合成内质网上合成的蛋白主要有：向细胞外分泌的蛋白、如抗体、激素；膜的整合蛋白；需要与其它细胞组分严格分开的酶，如溶酶体的各种水解酶；需要进行修饰的蛋白，如糖蛋白。Blobel等（1975）提出信号假说，认为蛋白质N端的信号肽，指导蛋白质转至内质网上合成，获1999年诺贝尔生理医学奖。BlobelwithmembersofhislaboratoryGünterBlobel蛋白质转移到内质网合成涉及以下成分：信号肽：位于N端，约16~30个氨基酸，含有6-15个连续排列的带正电荷的非极性氨基酸，又称开始转移序列。信号识别颗粒（SRP）：6种多肽和1个7SRNA组成，属RNP。与信号序列结合，导致Pr合成暂停。AASequencesofERSignalPeptides01添加标题SRP受体，ER膜的整合蛋白，异二聚体，可与SRP特异结合。添加标题停止转移序列，与内质网膜的亲合力很高，阻止肽链继续进入网腔，成为跨膜蛋白。0203添加标题转位因子，由3-4个Sec61蛋白构成的通道，每个Sec61由3条肽链组成。TranslocationofproteinsacrossER蛋白质转入内质网合成的过程：信号肽与SRP结合→肽链延伸终止→SRP与受体结合→SRP脱离→肽链进入内质网→信号肽切除→肽链延伸至终止。这种肽链边合成边向内质网腔转移的方式，称为co-translation。InsertionofTransmembraneproteinintotheERmembrane（二）蛋白质的修饰与加工包括糖基化、羟基化、酰基化、二硫键形成等，几乎所有内质网上合成的蛋白最终都被糖基化。糖基化的作用：使蛋白质能够抵抗消化酶的作用；赋予蛋白质传导信号的功能；某些蛋白只有在糖基化之后才能正确折叠。糖基一般连接在4种氨基酸上，分为2种：连接的糖基化：与天冬酰胺残基的NH2连接，糖为N-乙酰葡糖胺。连接的糖基化：与Ser、Thr和Hyp的OH连接，连接的糖为半乳糖或N-乙酰半乳糖胺，在高尔基体上进行。内质网上进行N-连接的糖基化。糖的供体为核苷糖，如GDP-甘露糖、UDP-N-乙酰葡糖胺。糖分子首先被糖基转移酶转移到膜上的磷酸长醇分子上，装配成寡糖链。再被寡糖转移酶转到Asn-X-Ser或Asn-X-Thr的Asn上。ProteinglycosylationinRERProteinglycosylationinRERProteinglycosylationinRERClathrincoatedvesiclesDeep-etchviewofatypicalclathrinlatticeSelectivetransportbyclathrincoatedvesicles当衣被小泡形成时，可溶性蛋白dynamin聚集成一圈围绕在芽的柄部，使柄部的膜尽可能地拉近（小于1.5nm），导致膜融合，pinchoff衣被小泡。（二）COPI衣被小泡功能：回收、转运内质网逃逸蛋白（escapedproteins）返回内质网；也可介导高尔基体不同区域间的蛋白质运输。组成：由7种蛋白组成。回收信号：Lys-Asp-Glu-Leu（KDEL）。COPIVesiclesCopIandIIVesiclesLys-Asp-Glu-Leu（KDEL）（三）C