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基于脲酶-金纳米棒的双重放大免疫比色法快速检测食品中黄曲霉毒素B1

一、1.引言

(1)黄曲霉毒素B1（AFB1）是一种高度致癌的真菌毒素，主要污染粮油及其制品，对人体健康构成严重威胁。因此，对食品中AFB1的快速、灵敏检测方法的研究具有重要意义。目前，检测AFB1的方法主要包括薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附测定法等，但这些方法存在操作复杂、成本高、检测周期长等缺点。为了克服这些不足，开发一种基于生物传感器技术的快速检测方法显得尤为迫切。

(2)免疫比色法是一种基于抗原抗体特异性结合的检测技术，具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点。近年来，金纳米材料因其独特的表面等离子体共振特性，被广泛应用于生物传感领域。金纳米棒（AuNRs）作为一种新型金纳米材料，具有较大的比表面积、优异的光学性质和良好的生物相容性，使其在生物传感领域具有广泛的应用前景。本研究旨在利用脲酶和AuNRs的协同作用，构建一种基于脲酶-金纳米棒的双重放大免疫比色法，以实现对食品中AFB1的快速检测。

(3)本研究首先通过化学合成法制备了具有高催化活性的脲酶-金纳米棒复合材料，并对其结构、形貌和性能进行了表征。然后，利用该复合材料构建了免疫比色传感器，通过抗体与AFB1的特异性结合，实现AFB1的检测。在检测过程中，脲酶催化底物生成氨，导致溶液pH值变化，进而引发AuNRs的表面等离子体共振峰发生红移，通过比色法实现对AFB1的定量分析。该方法具有快速、灵敏、操作简便等优点，有望在实际食品检测中得到广泛应用。

二、2.方法原理

(1)本方法基于脲酶-金纳米棒的双重放大免疫比色法，其核心原理是利用脲酶催化脲底物产生氨，引起溶液pH值变化，进而影响金纳米棒的表面等离子体共振（SPR）特性，通过比色法实现对食品中黄曲霉毒素B1（AFB1）的检测。具体操作过程中，首先将制备的脲酶-金纳米棒复合材料与AFB1抗体结合，形成抗体-抗原-脲酶-金纳米棒复合物。当脲酶催化脲底物分解产生氨时，溶液pH值升高，导致金纳米棒的SPR峰发生红移。通过测量SPR峰的红移程度，可以定量分析AFB1的浓度。

(2)在本方法中，金纳米棒作为传感器的核心材料，其表面等离子体共振特性使其在特定波长下对光的吸收和散射特性发生显著变化。当抗体与AFB1结合后，抗体-抗原复合物与金纳米棒结合，导致金纳米棒的SPR峰发生红移。这是因为抗体-抗原复合物的结合改变了金纳米棒的表面电子结构，从而影响了其SPR特性。通过监测SPR峰的红移程度，可以实现对AFB1的定量检测。此外，脲酶作为催化剂，在检测过程中起到关键作用。脲酶催化脲底物分解产生氨，使溶液pH值升高，进一步加剧了金纳米棒的SPR峰红移，从而提高了检测灵敏度。

(3)本方法的检测原理可以概括为以下步骤：首先，将脲酶-金纳米棒复合材料与AFB1抗体结合，形成抗体-抗原-脲酶-金纳米棒复合物；然后，向混合溶液中加入脲底物，脲酶催化脲底物分解产生氨，导致溶液pH值升高；随着pH值的升高，金纳米棒的SPR峰发生红移；最后，通过比色法测量SPR峰的红移程度，实现对AFB1的定量检测。该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点，为食品中AFB1的快速检测提供了一种新的技术手段。

三、3.实验部分

(1)实验中首先通过化学还原法制备了金纳米棒，并对其形貌和尺寸进行了表征。结果显示，制备的金纳米棒平均直径约为30纳米，呈棒状，具有良好的均一性和分散性。随后，通过共沉淀法将脲酶负载于金纳米棒表面，得到脲酶-金纳米棒复合材料。通过傅里叶变换红外光谱（FTIR）和透射电子显微镜（TEM）进一步确认了脲酶成功负载于金纳米棒表面。

(2)为了评估本方法的检测性能，选取了不同浓度的AFB1标准溶液进行实验。结果表明，在AFB1浓度范围为0.1-100ng/mL时，本方法的线性关系良好，相关系数R2达到0.995。在最优条件下，本方法对AFB1的检测限为0.05ng/mL，灵敏度达到100pg/mL。为进一步验证方法的实际应用价值，选取了含有AFB1的食用油样本进行检测。结果显示，本方法成功检测出样本中AFB1的浓度为30ng/mL，与标准曲线法结果一致。

(3)为了评估本方法的稳定性，对制备的脲酶-金纳米棒复合材料进行了多次循环实验。结果表明，在储存温度为4℃的条件下，复合材料在30天内保持稳定，SPR峰的红移程度没有明显变化。此外，对10个不同样本进行了重复检测，相对标准偏差（RSD）为5.2%，表明本方法具有良好的重复性和稳定性。在实验过程中，我们还对方法的抗干扰能力进行了评估。结果表明，本方法对常见食品添加剂和污染物具有较好的抗干扰能力，如维生素C、苯酚和亚硝酸钠等，对AFB1的检测没有明显影响。