配子与胚胎生物工程课件.pptVIP

8）、擠壓法去核：在PB1附近，將透明帶切開，調准切口，固定卵母細胞，使切割針與其成垂直方向，向下擠壓除去PB1連同下麵的一小部分細胞質。9）、點擊法去核：在PB1附近，將卵母細胞透明帶切開1/3，調准切口，使其與切割針成垂直方向，固定卵母細胞，用顯微針點擊透明帶，除去PB1連同下麵的一小部分細胞質。B-超活采儀B超活體采卵活體採集的牛卵母細胞3、卵母細胞的體外成熟（IVC）1）、培養液：用於卵母細胞體外成熟的最為廣泛基礎培養液是M199。培養時尚要加入一定的血清和激素。2）、溫度和氣相：牛、豬、羊和馬等家畜的卵母細胞體外成熟培養的溫度一般為38～39℃。所有哺乳動物卵母細胞體外成熟培養的氣相一般要求在含5％C02的空氣和最大濕度的環境。3）．培養時間：牛和羊卵母細胞體外成熟培養的時間一般為22～24h，而馬為30～36h，豬為40～44h。4）．培養方法：卵母細胞體外成熟的培養方法一般採用微滴法、封閉法和開放法三種。CO2培養箱（二）卵母細胞的體外受精（IVF）1、精子的製備：懸浮法（swimup）；直接離心法；呱可（Percoll）密度梯度離心法2、精子獲能處理：肝素處理法；鈣離子載體法；高滲溶液處理法3、受精液：通常使用Tyrode’s改良液和BO液4、受精方法：微滴法、四孔培養板法5、精卵共培養的時間、溫度和氣相：受精後，卵母細胞應立即放入溫度39℃，含5％CO2的空氣和最大相對濕度的CO2培養箱中培養24～44h，其中牛22～24h，將假定的受精卵從受精液中取出，再在早期胚胎體外培養液中繼續培養18～33h。受精後40～44h檢查受精卵的分裂率（三）早期胚胎的體外培養（IVC）1、培養液：基本成分主要包括無機鹽、氨基酸、維生素、碳水化合物和蛋白質等。2、胚胎體外培養系統：常規培養系統、輸卵管離體培養系統、與體細胞共培養系統。3．培養方法：卵子在受精24h後，轉移到預先製備好的顆粒單層中繼續培養。一般使用微滴培養法。4、培養的溫度和氣相環境：和卵母細胞成熟的條件一樣。5．胚胎的回收及其品質評定：以牛為例，整個體外受精程式，從卵母細胞成熟培養開始，經過體外受精和體外培養直至受精卵發育到囊胚階段，一共經歷8d的時間。如定受精當天為0d，則受精後第5～6d即可回收桑椹胚，第7～8d回收囊胚。

1--cell2--cell4--8cell桑椹胚囊胚體外受精體外培養三、家畜體外受精技術的發展現狀和存在的問題（一）發展現狀動物卵裂率囊胚率冷凍後存活率鮮胚移植後的產仔率牛８０％－９０％４０％－５０％８０％３０％－４０％羊８０％－９０％３０％－４０％８０％５０％豬９０％６０％－７０％－５０％（二）存在的問題和發展方向1、存在的問題１）囊胚發育率低，細胞數少。２）產仔率低，胎兒初生重高。2、發展的方向１）深入研究卵母細胞成熟和胚胎發育的分子機理；２）加強腔前卵泡的培養研究，充分利用優良母畜的遺傳資源；３）加強體外受精與其他生物技術的結合。四、輔助受精技術(assistedfertilization)透明帶下注射(Subzonalinjection,SUZI)透明帶鑽孔(Zonadrilling,ZD)活精子透明帶部分切口(Partialzonadissection,PZD)卵母細胞質內注射(Intracytoplasmicsperminjection,ICSI)這些通過對哺乳類配子進行顯微操作以協助其受精的技術稱為顯微受精。精子顯微注射體外受精技術IntracytoplasmicSpermInjection:ICSI顯微受精技術在動物受精和發育機理研究、畜牧業生產及人醫臨床實踐中有著廣闊的應用前景：精液的利用率可成百萬倍的提高，可以使優良種公畜得到最充分的應用；精子的保存技術將大為簡化，將來或許只要精子核物質完整就可以達到受精的目的，這對世界珍稀動物資源的保護將產生深遠的影響；與其他技術結合，如將已經過性別鑒定的精子注入卵子受精，可人為控制家畜後代的性別。第三節克隆技術Animalcloning一、概述二、胚胎分割三、單個卵裂球分離培養四、細胞核移植一、概述“克隆”的定義動物克隆：是指由一個動物經無性繁殖（asexualreproduction）或孤雌生殖而產生的多個具有與親本相同遺傳資訊的同質性後代，包括孤雌啟動生殖、卵裂球分離與培養、胚胎分割以及核移植等。胚胎分割：人為的將早期胚胎分割成兩個或幾個，然後移植給受體母畜可