《动物细胞培养HXY》课件.pptVIP

**********************动物细胞培养HXY课程介绍本课程涵盖动物细胞培养的理论基础和实验操作从细胞培养的基本原理到常见技术应用为学生提供细胞培养实验的技能训练和实践经验细胞培养的重要性研究工具细胞培养是现代生物学研究中必不可少的工具，为研究细胞的结构、功能、代谢、遗传等提供了重要的模型。疾病研究细胞培养在疾病研究中发挥着重要作用，例如，用于研究病原体的感染机制、筛选药物和评估药物疗效等。生物制药细胞培养是生物制药的重要生产方式，例如，用于生产疫苗、抗体、激素等生物制品。细胞培养的基本原理模拟体内环境提供必要的营养物质，例如氨基酸、维生素、无机盐和葡萄糖，以及氧气和合适的pH值，以维持细胞生长和代谢。无菌操作确保培养环境无菌，防止污染，保护细胞免受细菌、真菌和病毒的侵害，确保实验结果的可靠性。细胞增殖提供合适的条件，如温度、湿度和气体浓度，促进细胞增殖，形成细胞群体，用于后续实验或研究。细胞培养实验室的建设要求1环境控制严格控制温度、湿度和气压，确保细胞生长环境稳定。2无菌操作配备超净工作台、生物安全柜等设备，防止细菌和真菌污染。3设备齐全配置细胞培养箱、显微镜、离心机等专业设备，满足培养需求。细胞培养基的配制1基础培养基的选择选择合适的培养基类型，例如DMEM、RPMI1640等。2添加血清和生长因子根据细胞类型添加不同浓度的血清和生长因子。3调节pH值和渗透压确保培养基的pH值和渗透压适宜细胞生长。4灭菌处理使用滤器或高压灭菌器对培养基进行灭菌处理。培养基是细胞生长的基础，需要根据不同细胞类型进行配制。细胞克隆的操作步骤1细胞克隆2单细胞分离3培养4克隆鉴定细胞克隆的过程从单细胞分离开始。单个细胞通过限制性稀释或显微操作进行分离。然后将分离的细胞培养在适当的培养基中，并提供所需的生长因子和营养物质，以促进细胞生长和增殖。最后，通过基因型分析或表型分析对克隆进行鉴定，以确保其来源于单个细胞，并具有所需的特征。细胞株的传代消化细胞使用胰蛋白酶或其他酶将细胞从培养皿中分离下来。离心收集将细胞悬液离心，去除消化液并收集细胞。重新悬浮将细胞悬浮在新鲜培养基中，并转移到新的培养皿中。培养观察将培养皿置于培养箱中，并定期观察细胞生长状况。细胞计数的方法血球计数板法利用血球计数板进行细胞计数，这种方法简单快速，但需要一定的技巧才能获得准确的结果。自动细胞计数仪利用自动细胞计数仪可以快速准确地进行细胞计数，减少人为误差，提高效率。流式细胞术流式细胞术可以根据细胞的大小、形状、荧光强度等特征进行细胞计数和分析，适用于多种细胞类型。细胞生长曲线的测定步骤描述细胞计数在不同时间点进行细胞计数，以确定细胞数量的变化。数据记录将细胞计数结果记录在表格或图表中。绘图将记录的数据绘制成生长曲线，以显示细胞数量随时间的变化趋势。细胞活力检测1MTT法利用活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原四唑盐MTT为紫色结晶，可通过比色法测定细胞的活力。2台盼蓝染色法活细胞膜完整，不能被台盼蓝染料染色，而死亡细胞的细胞膜破损，能被台盼蓝染料染色，可通过显微镜观察判断细胞活力。3ATP检测利用萤火虫荧光素酶测定细胞内的ATP含量，ATP含量越高，细胞活力越高。细胞凝结实验细胞团块细胞凝结是指细胞聚集形成团块的现象，它可能会影响细胞的生长和实验结果。原因培养基成分不当培养条件不适宜细胞密度过高细胞本身的特性解决方法调整培养基，控制细胞密度，优化培养条件，选择合适的细胞培养方法。细胞黏附实验细胞培养在细胞培养皿或培养瓶中培养特定类型的细胞。基质涂层在培养皿或培养瓶底部涂覆特定的基质，例如胶原蛋白或纤连蛋白。观察与分析使用显微镜观察细胞黏附情况，分析黏附效率和形态变化。细胞迁移实验1细胞迁移的概念细胞迁移是细胞从一个位置移动到另一个位置的过程，它在许多生物学过程中起着至关重要的作用，例如胚胎发育、伤口愈合和免疫应答。2细胞迁移实验方法细胞迁移实验方法通常利用体外模型，例如划痕实验、Transwell实验和微流控实验，来研究细胞迁移的行为。3细胞迁移的影响因素影响细胞迁移的因素包括细胞外基质、生长因子、趋化因子和细胞内信号通路。细胞株的冻存与复苏1复苏快速解冻2冻存缓慢降温3细胞培养生长良好细胞株的质量控制身份验证确保细胞株的真实性和纯度，防止交叉污染。功能验证评估细胞株的生物学功能，确保其与预期一致。污染检测定期检查细胞株是否存在细菌、真菌或病毒污染。动物