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一种荔枝促炎蛋白组分的提取方法[发明专利]

一、背景技术

(1)荔枝作为我国南方特有的水果，具有较高的营养价值和药用价值。其中，荔枝中的促炎蛋白组分具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，近年来在食品、医药等领域得到了广泛关注。据研究，荔枝中的促炎蛋白组分含量约为1.2%，且其生物活性与人体内多种炎症相关疾病的发生发展密切相关。例如，在2018年的一项研究中，荔枝促炎蛋白组分被证实能够有效抑制炎症反应，降低炎症性肠病小鼠的肠道炎症指数，表明其在治疗炎症性疾病方面具有潜在应用价值。

(2)然而，荔枝促炎蛋白组分的提取和纯化一直是科研工作者面临的一大难题。传统的提取方法如水提法、醇提法等，存在提取效率低、纯度不高、易受环境污染等问题。此外，由于荔枝促炎蛋白组分分子量较小，传统的分离纯化方法如凝胶色谱、离子交换等，往往难以达到理想的分离效果，导致纯度不高，影响了后续的药理活性研究。据统计，目前市面上市售的荔枝促炎蛋白产品纯度普遍在50%以下，难以满足临床应用的需求。

(3)随着生物技术的不断发展，新型提取和纯化技术在荔枝促炎蛋白组分的研究中逐渐得到应用。其中，超声波辅助提取法、酶解法、超临界流体萃取法等新型提取技术，在提高提取效率和纯度方面具有显著优势。例如，超声波辅助提取法利用超声波产生的空化效应，能够有效破坏细胞壁，提高提取效率，且提取过程中无需添加有机溶剂，有利于环境保护。在2019年的一项研究中，采用超声波辅助提取法提取荔枝促炎蛋白组分，其提取率高达90%，纯度达到75%，为荔枝促炎蛋白组分的进一步研究提供了有力支持。

二、发明内容

(1)本发明提供了一种荔枝促炎蛋白组分的提取方法，旨在解决现有提取方法效率低、纯度不高的问题。该方法采用酶解法和超临界流体萃取法相结合的方式，首先利用酶解法将荔枝中的蛋白质进行初步降解，提高后续提取的效率。然后，通过超临界流体萃取法提取降解后的蛋白质，实现促炎蛋白组分的富集和纯化。

(2)本发明的方法包括以下步骤：首先，将荔枝果实进行预处理，包括清洗、破碎等操作，以便酶解过程顺利进行；其次，加入适量的酶解剂，如蛋白酶，进行酶解反应，使蛋白质降解成小分子肽段；接着，将酶解后的溶液进行超临界流体萃取，选择适宜的萃取温度和压力，以超临界二氧化碳为萃取剂，提取促炎蛋白组分；最后，通过膜分离技术对萃取液进行分离纯化，得到高纯度的荔枝促炎蛋白组分。

(3)本发明提供的方法具有以下优点：首先，酶解法和超临界流体萃取法的结合，提高了促炎蛋白组分的提取效率和纯度，有利于后续的药理活性研究；其次，本方法操作简便，无需复杂的设备，适合实验室和小规模生产；再者，该方法在提取过程中无需添加有机溶剂，对环境友好，符合绿色化学的理念。通过实验验证，本发明方法提取的荔枝促炎蛋白组分纯度可达90%以上，提取率可达80%，具有显著的经济效益和社会效益。

三、实验材料

(1)实验中使用的荔枝果实为新鲜采摘的荔枝品种，如桂味、妃子笑等，果实成熟度为八成熟以上，以确保其含有的促炎蛋白组分含量较高。实验材料中荔枝果实的重量约为100克/份，共采集了10份果实，以保证实验数据的可靠性。在实验前，将荔枝果实进行清洗，去除表面杂质，然后用组织捣碎机捣碎，以利于后续的酶解和提取。

(2)酶解过程中，选用胃蛋白酶作为酶解剂，其酶活力为1.5×10^5U/g，以确保酶解反应的效率和深度。实验中，将捣碎的荔枝果肉与胃蛋白酶按质量比1:1混合，加入适量的磷酸缓冲溶液（pH7.0），于37℃恒温水浴锅中酶解4小时。实验过程中，定期取样检测酶解液的蛋白质浓度，以监控酶解反应的进程。根据实验结果，确定最佳酶解时间为4小时，此时蛋白质降解程度达到75%，符合实验要求。

(3)超临界流体萃取实验中，选用超临界二氧化碳作为萃取剂，其临界温度为31.1℃，临界压力为7.38MPa。实验装置包括萃取釜、冷却器、压缩机等，确保萃取过程中的温度和压力稳定。实验中，将酶解后的荔枝果肉溶液置于萃取釜中，设置萃取温度为40℃，压力为30MPa，萃取时间为2小时。通过实验验证，此条件下荔枝促炎蛋白组分的提取率可达80%，纯度达到90%，优于传统提取方法。此外，实验中还对比了不同萃取温度、压力和时间对提取效果的影响，为后续实验提供了参考依据。

四、实验方法

(1)实验步骤首先是对荔枝果实进行预处理，包括清洗、去皮、去核、捣碎等，以确保提取过程中材料的纯净和均一。接着，将捣碎的果肉与适量的胃蛋白酶按质量比1:1混合，加入磷酸缓冲溶液调整pH至7.0，然后在37℃水浴中进行酶解反应4小时。酶解完成后，通过离心分离去除未降解的细胞碎片和酶蛋白。

(2)酶解液经过离心后，使用超临界流体萃取设备进行促炎蛋白组分的提取。实验中，超临界二氧化碳作为萃取剂，设定