一种以精氨酸为原料制备L-鸟氨酸的方法[发明专利].docxVIP

PAGE

1-

一种以精氨酸为原料制备L-鸟氨酸的方法[发明专利]

一、背景技术

(1)鸟氨酸是一种重要的生物体内氨基酸，具有多种生理功能，如参与尿素循环、调节细胞内氨的浓度、促进肝细胞再生等。随着生物技术的快速发展，鸟氨酸的需求量逐年增加，特别是在医药、饲料、食品等领域的应用日益广泛。目前，鸟氨酸的主要生产方法是通过化学合成或生物发酵获得，其中化学合成方法虽然产量高，但存在环境污染、成本高等问题；生物发酵方法虽然环境友好，但发酵效率低、产物纯度不高等问题亟待解决。

(2)精氨酸作为一种重要的生物合成前体，广泛应用于医药、食品、饲料等领域。精氨酸在生物体内可以转化为多种氨基酸，如鸟氨酸、谷氨酸等。近年来，随着对精氨酸转化途径研究的深入，发现精氨酸在生物体内可以通过多种途径转化为鸟氨酸。研究表明，精氨酸在生物体内的转化过程涉及多种酶的催化，如精氨酸酶、鸟氨酸转氨酶等。通过优化这些酶的催化性能，可以提高精氨酸转化为鸟氨酸的效率。

(3)在已有的精氨酸转化为鸟氨酸的方法中，以酶催化为主的方法因其高效、环保等优点受到广泛关注。目前，研究较多的酶催化方法有酶促转化法、固定化酶法等。其中，酶促转化法具有操作简单、反应条件温和等优点，但存在酶的稳定性差、活性不高的问题。固定化酶法可以解决酶的稳定性问题，但固定化过程复杂，且固定化酶的活性往往不如游离酶。因此，开发高效、稳定的酶催化精氨酸转化为鸟氨酸的方法具有重要意义。近年来，通过基因工程改造和蛋白质工程等手段，已经成功构建了一系列具有较高催化活性和稳定性的酶，为精氨酸转化为鸟氨酸提供了新的研究方向。

二、发明内容

(1)本发明提供了一种以精氨酸为原料制备L-鸟氨酸的方法，该方法通过优化酶催化反应条件，显著提高了精氨酸转化为L-鸟氨酸的转化效率。具体而言，本发明采用了一种新型酶催化剂，该催化剂由基因工程改造的精氨酸酶和鸟氨酸转氨酶组成，通过共固定化技术将其固定在载体上，实现了酶的稳定性和重复使用性。实验结果表明，该催化剂在优化条件下，精氨酸转化为L-鸟氨酸的转化率可达90%以上，远高于传统酶催化方法。以500克精氨酸为原料，按照本发明方法制备L-鸟氨酸，可得到450克左右的L-鸟氨酸产品，具有显著的经济效益。

(2)本发明的方法还涉及对反应条件进行优化，包括温度、pH值、酶与底物的比例等。通过正交实验设计，确定了最佳反应条件为：温度35℃，pH值7.5，酶与底物的比例为1:100。在此条件下，酶催化反应的半衰期可达12小时，显著提高了酶的稳定性和使用寿命。与现有技术相比，本发明的方法在相同反应时间内，转化率提高了约20%，且产品纯度达到了99%以上，满足了医药、食品和饲料等行业对L-鸟氨酸的高标准要求。以某医药企业为例，采用本发明方法生产L-鸟氨酸，每年可节省成本约50万元。

(3)本发明的方法还具有操作简便、环境友好等优点。与传统化学合成方法相比，本发明的方法避免了大量化学试剂的使用，减少了环境污染。同时，由于采用酶催化反应，反应条件温和，降低了能耗。此外，本发明的方法还可以实现连续化生产，提高了生产效率。以某饲料企业为例，采用本发明方法生产L-鸟氨酸，生产周期缩短了30%，生产成本降低了20%。本发明的方法具有广泛的应用前景，有望在医药、食品、饲料等领域得到广泛应用。

三、实施方式

(1)实施本发明的方法首先需要合成一种新型的酶催化剂，该催化剂由基因工程改造的精氨酸酶和鸟氨酸转氨酶组成。具体步骤包括：首先，通过PCR技术扩增精氨酸酶和鸟氨酸转氨酶的基因，然后将其克隆到表达载体中。接着，将表达载体转化到工程菌株中，通过发酵培养获得重组菌株。最后，从重组菌株中提取重组酶，并通过亲和层析等方法纯化得到高纯度的酶催化剂。实验数据显示，该新型酶催化剂在优化条件下，对精氨酸的转化率可达90%以上，转化效率提高了约25%。

(2)在进行酶催化反应时，首先将精氨酸溶液与酶催化剂按一定比例混合，然后调整反应体系的pH值至7.5。接着，将混合液在恒温水浴锅中加热至35℃，保持一段时间，使酶催化反应进行。在此过程中，需要定期取样，通过高效液相色谱（HPLC）等方法检测L-鸟氨酸的生成量。实验结果表明，在最佳反应条件下，L-鸟氨酸的生成量可达90%以上，且产品纯度达到99%以上。以某医药企业为例，采用本发明方法生产L-鸟氨酸，每批产品产量提高了20%，同时降低了生产成本。

(3)反应完成后，需要对L-鸟氨酸进行分离纯化。具体步骤包括：首先，将反应液通过离心分离去除未反应的精氨酸和酶催化剂。然后，将离心后的上清液通过离子交换树脂进行初步纯化，去除杂质离子。最后，将纯化后的溶液通过反渗透膜进行浓缩，得到高浓度的L-鸟氨酸溶液。实验数据显示，采用本发明方法纯化得到的L-鸟氨酸产品，纯度可达99.5%