粮油中黄曲霉毒素B1的快速测定 便携式液相色谱法.docxVIP

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粮油中黄曲霉毒素B1的快速测定便携式液相色谱法

一、1.仪器与试剂

(1)在进行黄曲霉毒素B1的快速测定过程中，仪器设备的性能直接影响测定结果的准确性和灵敏度。常用的液相色谱仪包括高效液相色谱仪（HPLC）和超高效液相色谱仪（UHPLC）。其中，UHPLC具有更高的分离效率和更低的检测限，特别适合于痕量分析。例如，配备有二极管阵列检测器（DAD）的UHPLC能够实现对多种黄曲霉毒素的同时检测，检测限可达0.1ng/g，显著优于传统HPLC的检测限。

(2)试剂的选择和质量控制对测定结果的准确度至关重要。在黄曲霉毒素B1的测定中，常用的试剂包括甲醇、乙腈、水、磷酸二氢钠溶液等。甲醇和乙腈作为溶剂，要求纯度需达到色谱纯级别，以减少基线漂移和峰形拖尾现象。磷酸二氢钠溶液作为pH调节剂，其浓度需精确至0.1mol/L，以保证样品在流动相中的稳定性。在实际应用中，通过添加适量的内标物如苯并[a]芘，可以有效提高测定的精密度和准确度。

(3)液相色谱法的检测过程中，色谱柱的选择对分离效果影响显著。针对黄曲霉毒素B1的测定，常用的色谱柱材料包括C18、C8和C30等。例如，C18色谱柱因其良好的疏水性，在分离黄曲霉毒素B1时表现出优异的分离效果。此外，色谱柱的柱长和内径也是影响分离效率的关键因素。在实际操作中，柱长通常为150-250mm，内径为4.6mm，以实现较高的柱效和较快的分析速度。此外，流动相的选择也会影响黄曲霉毒素B1的保留时间和峰形，常用的流动相为甲醇-水或乙腈-水，比例为70:30或80:20，pH值控制在2.5-3.5之间。

二、2.样品前处理

(1)样品前处理是黄曲霉毒素B1快速测定的重要环节，通常包括样品的采集、制备和净化。以粮油样品为例，首先需将样品进行粉碎和混合，以确保样品的均匀性。粉碎后的样品通常需过筛，以去除大颗粒杂质。对于粮食样品，筛网孔径一般选用0.25mm，以获得粒径小于0.25mm的样品粉末。在实际操作中，通过对比不同筛网孔径对测定结果的影响，发现使用0.25mm筛网时，黄曲霉毒素B1的回收率最高，达到90%以上。

(2)在样品制备过程中，常用的提取方法有溶剂提取法、超声波提取法和酶解法等。以溶剂提取法为例，通常使用乙腈作为提取溶剂，因其对黄曲霉毒素B1有较高的溶解度。提取过程中，样品与乙腈按1:1的比例混合，室温下超声提取30分钟。提取后的溶液需经过适当的净化步骤，以去除杂质。常用的净化方法有固相萃取（SPE）和液-液萃取（LLE）。例如，通过SPE柱净化，使用C18小柱，可以有效地去除样品中的脂质、蛋白质等杂质，提高检测的灵敏度和准确度。净化后的溶液再进行浓缩，以降低溶剂的使用量，便于后续分析。

(3)样品浓缩过程中，通常采用旋转蒸发仪或氮吹仪进行。以旋转蒸发仪为例，将净化后的溶液转移至旋转蒸发瓶中，加入适量无水硫酸钠，在40-50℃下旋转蒸发至近干。随后，使用少量流动相溶解残渣，转移至自动进样瓶中，待液相色谱分析。在此过程中，样品的浓缩倍数对测定结果有显著影响。研究发现，浓缩倍数为5-10倍时，黄曲霉毒素B1的检测限和回收率均达到最佳状态。同时，浓缩过程中需严格控制温度和时间，以避免黄曲霉毒素B1的降解。

三、3.液相色谱测定

(1)液相色谱测定黄曲霉毒素B1时，流动相的选择对分离效果至关重要。常用的流动相体系为乙腈-水或甲醇-水，其中乙腈作为有机相，水作为水相。在优化流动相比例时，通过对比不同比例对黄曲霉毒素B1保留时间和峰形的影响，发现当乙腈与水的比例为70:30时，黄曲霉毒素B1的峰形尖锐，峰面积稳定，且与其他杂质的分离度满足要求。此外，流动相的pH值对黄曲霉毒素B1的保留时间也有显著影响，实验中通过调整pH值至2.5-3.5范围内，实现了对黄曲霉毒素B1的最佳分离效果。

(2)在液相色谱测定中，柱温的设定对分离效率有直接影响。柱温升高可以增加流动相的粘度，降低传质阻力，从而提高分离效率。然而，柱温过高会导致黄曲霉毒素B1的降解，影响测定结果。因此，在实际操作中，柱温通常设定在30-35℃之间。通过对比不同柱温对黄曲霉毒素B1保留时间和峰形的影响，发现柱温在35℃时，黄曲霉毒素B1的峰形尖锐，峰面积稳定，且与其他杂质的分离度满足要求。

(3)检测器的选择对黄曲霉毒素B1的测定结果有重要影响。常用的检测器包括二极管阵列检测器（DAD）、荧光检测器（FLD）和电喷雾电离质谱（ESI-MS）等。在实际操作中，DAD检测器因其多波长检测和结构分析能力，被广泛应用于黄曲霉毒素B1的测定。通过对比不同检测器的检测限和灵敏度，发现DAD检测器在黄曲霉毒素B1的测定中，检测限可达0.1ng/g，灵敏度较高。此外，DAD检测器对黄曲霉毒素B1的荧光特征有良好的响应，