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芝麻酱中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定

一、1.黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2概述

(1)黄曲霉毒素（Aflatoxins）是一类由某些曲霉菌和青霉菌产生的次级代谢产物，主要包括B1、B2、G1、G2和M1等。其中，黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1，AFB1）是最为著名和最具毒性的一个成员，其致癌性已被世界卫生组织（WHO）列为1类致癌物。AFB1主要污染粮油、坚果、谷物等食品，对人类健康构成严重威胁。据统计，全球每年约有10万人因AFB1中毒而死亡。

(2)黄曲霉毒素的毒性主要表现为肝脏损害，可引起急性中毒、慢性中毒甚至肝癌。AFB1的毒性约为氰化钾的100倍，且对热稳定，在高温下不易分解。研究表明，低剂量的AFB1长期摄入也可能导致肝癌等严重疾病。例如，在非洲一些地区，由于粮食污染严重，当地居民肝癌发病率较高。

(3)为了保障食品安全，各国政府均对食品中的黄曲霉毒素含量制定了严格的限量标准。例如，我国规定玉米、花生油、花生及其制品等食品中AFB1的最大限量分别为20ng/g、10ng/g、5ng/g和2ng/g。近年来，随着检测技术的不断进步，食品安全监管部门对食品中黄曲霉毒素的检测力度也在不断加强，以降低食品安全风险，保障人民群众的身体健康。

二、2.测定原理与方法

(1)黄曲霉毒素的测定方法主要包括薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）等。薄层色谱法因其操作简便、成本低廉而广泛应用于初步筛选和检测。然而，该方法灵敏度较低，不适合痕量分析。高效液相色谱法具有高灵敏度和高选择性，是实验室中常用的测定方法。HPLC结合荧光检测器（FLD）或液质联用（LC-MS）等技术，可实现对黄曲霉毒素的准确定量。

(2)在高效液相色谱法中，样品通常需要经过提取、净化和衍生化等步骤。提取方法有溶剂提取、固相萃取（SPE）和微波辅助提取等，其中固相萃取因其高效、选择性好而被广泛应用。净化步骤的目的是去除样品中的杂质，提高检测的准确性和灵敏度。衍生化过程则用于增强黄曲霉毒素的荧光性质，便于检测。

(3)酶联免疫吸附测定法是一种快速、简便的定量分析方法，尤其适用于现场快速检测。ELISA检测基于抗原抗体特异性结合的原理，通过检测抗体与黄曲霉毒素的结合情况来判断样品中黄曲霉毒素的含量。该方法灵敏度高、操作简便，但存在交叉反应和假阳性的风险。因此，在实际应用中，常需结合其他方法进行验证。随着技术的不断发展，黄曲霉毒素的测定方法也在不断优化和改进，以满足食品安全检测的需求。

三、3.样品前处理

(1)样品前处理是黄曲霉毒素测定过程中的关键步骤，其目的是将样品中的黄曲霉毒素从复杂的环境中提取出来，并去除干扰物质，从而提高后续分析的灵敏度和准确性。在样品前处理中，通常包括样品的采集、样品的粉碎、样品的提取和样品的净化等环节。

样品采集时，应严格按照操作规程进行，确保样品的代表性和完整性。采集后的样品应迅速放入清洁、干燥的容器中，并密封保存，以防止样品的污染和黄曲霉毒素的降解。样品的粉碎过程需要使用专门的粉碎设备，如球磨机或搅拌磨，以获得均匀的粉末样品，便于后续的提取操作。

(2)提取是样品前处理的核心步骤，常用的提取方法有溶剂提取、固相萃取（SPE）和微波辅助提取等。溶剂提取法是最传统的提取方法，常用的溶剂包括乙腈、甲醇、丙酮等。提取过程中，样品与溶剂在匀浆机或超声波清洗器中充分混合，以确保黄曲霉毒素充分溶解。提取后的溶液需要通过离心或过滤去除固体杂质。

固相萃取法因其操作简便、回收率高、选择性良好等优点而被广泛应用。SPE过程包括样品的吸附、洗脱和干燥等步骤。样品在SPE小柱上吸附，干扰物质被洗脱，而黄曲霉毒素则保留在柱上。随后，通过洗脱液将黄曲霉毒素从柱上洗脱下来，再经过干燥和复溶于适当溶剂，以便进行后续的分析。

(3)净化是样品前处理的重要环节，其目的是去除提取过程中可能引入的杂质，如溶剂、盐类、色素等，以提高检测的准确性和灵敏度。常用的净化方法有液-液萃取、柱层析、吸附剂净化等。液-液萃取法通过选择性地将黄曲霉毒素从水相转移到有机相中，从而实现净化。柱层析法则是利用不同物质在固定相和流动相中的分配系数差异进行分离和净化。吸附剂净化则利用吸附剂对黄曲霉毒素的吸附作用，去除干扰物质。净化后的样品经过适当的稀释和复溶，即可进行黄曲霉毒素的测定。在整个样品前处理过程中，应注意操作的无菌性和避免交叉污染，以保证检测结果的可靠性。

四、4.测定步骤与操作

(1)在进行黄曲霉毒素的测定时，首先需要对样品进行前处理，包括提取和净化。提取后的样品需要通过高效液相色谱仪（HPLC）进行分离和检测。操作步骤如下：将净化后的样品溶液过柱，使用适当溶剂进行梯度洗脱，收集