血尿淀粉酶及其同工酶活性测定血清脂肪酶活性测定血清尿胰蛋白酶活性测定胰腺疾病的实验室检.ppt

1.血、尿淀粉酶及其同工酶活性测定2.血清脂肪酶活性测定3.血清、尿胰蛋白酶活性测定胰腺疾病的实验室检查目前仍以胰腺酶检测为主。胰腺疾病检验淀粉酶（α-amylase，AMY）又称α-1,4-葡聚糖水解酶，作用于多糖分子的α-1,4-糖苷键，生成麦芽糖和葡萄糖。淀粉酶分子量约为62kD，很易由肾脏排出。α-淀粉酶主要存在于胰腺、唾液腺及其分泌液中，对食物中多糖化合物的消化起重要作用。血清淀粉酶主要有两种同工酶，即同工酶P（来源于胰腺）及同工酶S一、血、尿淀粉酶及同工酶活性测定淀粉酶是临床应用最早的酶，测定方法多达200余种一般可将这些方法归纳为二类：一类是以天然淀粉为底物的测定法。由于天然淀粉的分子结构和组成不确定，难以达到方法学标准化，测定的准确性和重复性都较差另一类是限定底物法，使用分子组成确定的小分子寡聚糖或对-硝基苯酚-糖苷等作为淀粉酶底物，与辅助酶、指示酶共同组成淀粉酶测定系统。此类方法最突出的优点是底物的结构、分子量和水解产物确定，方法简便快速，精密度好，线性范围宽，是目前测定淀粉酶较为理想的方法（一）淀粉酶的测定【实验原理】血清(或血浆)中α-淀粉酶（AMY）催化淀粉分子中α-1,4-糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖及含有α-1,6-糖苷键支链的糊精。在底物过量且浓度已知的条件下，保温反应到规定时间后加入含强酸的碘液终止反应，并与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物（碘色反应），其蓝色的深浅与未经酶促反应的空白管比较，从而计算出AMY的活力单位1.碘－淀粉比色法【实验原理】以对－硝基苯麦芽庚糖苷（4NP-G7）为底物，经α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶催化下，水解为葡萄糖和对-硝基酚。对-硝基酚的生成量在一定范围内与α-淀粉酶活性成正比。2.限定底物法碘－淀粉比色法血清80～180U/dl尿液100～1200U/dl连续监测法血清淀粉酶参考值上限：37℃，220U/L尿液淀粉酶参考值上限：37℃，1200U/L【参考区间】血清AMY主要用于诊断急性胰腺炎及急腹症的鉴别诊断急性胰腺炎发病后8～12小时血清AMY开始增高，12～24小时达高峰，2～5天下降至正常。如达350U/dl时应怀疑此病，超过500U/dl有诊断意义。急性阑尾炎、肠梗阻、胰腺癌、胆石症、溃疡病穿孔及吗啡注射后等均可见血清AMY增高，但常低于500U/dl尿AMY约于急性胰腺炎发病后12～24小时开始升高，下降也比血清AMY慢，在急性胰腺炎后期测定尿AMY更有价值由于正常人血清中AMY主要由肝脏产生，故血清与尿AMY同时减低主要见于肝炎、肝硬化、肝癌及急性和慢性胆囊炎、急性酒精中毒等【临床意义】脂肪酶（lipase，LPS）又称甘油三酯酶，是胰腺外分泌酶，通常只有小部分进入血循环。血清中的脂肪酶主要来自胰腺，少量来自胃肠黏膜脂肪酶作用于底物和水的交界面，故仅当底物在乳化状态时脂肪酶才能发挥作用。现多用去氧胆酸钠作乳化剂配制底物脂肪酶的测定方法主要有比浊法、色原底物法或酶偶联法二、血清脂肪酶活性测定