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最新：基于实时荧光定量PCR技术的肿瘤分子病理检测临床实践中国

专家共识（2023）

恶性肿瘤分子病理检测是个体化治疗的前提和基础。目前，我国常用

的分子病理检测平台包括实时荧光定量PCR（quantitativereal-time

PCR,qPCR）、荧光原位杂交＞Sanger测序和高通量测序等，其中qPCR

技术具有操作简便、耗时短、灵敏度高等优势。qPCR技术利用不同波

长的荧光基团标记探针，动态监测反应管中的荧光强度，形成PCR扩

增曲线，间接反映靶基因扩增产物含量，从而对靶基因变异情况进行定

性或半定量分析。目前，常见的qPCR技术包括扩增阻滞突变系统PCR、

逆转录qPCR、多重连接依赖性探针扩增PCR技术和数字PCR技术等,

能够对基因点突变、插入缺失、融合等进行检测。

qPCR技术近年来在肿瘤分子病理检测领域得到广泛应用,检测标准

化和规范化对提升肿瘤分子病理检测水平和促进个体化诊治具有重要

意义。本共识由具有丰富理论和检测实践经验的病理、分子病理专家共

同发起并制定，旨在为qPCR技术检测实践提供指导和帮助。本共识包

括qPCR检测技术的样本选择、前处理、检测流程、性能验证、质量管

理、常见问题和异常结果处理等多个临床实践重要部分，推荐意见基于

国内外临床实践数据并结合我国国情，分为强烈推荐（证据充分且专家

组达成一致共识，在检测条件充分的环境下优先推荐开展的措施）、推

荐（证据较充分且专家组达成基本一致共识，基于特定实际检测条件推

荐开展的措施）和不推荐3个等级。共识制定计划已在国际实践指南注

册平台（http://www.guidelines—registr.org/）注册（注册号：

PREPARE一2023CN093）。

一、样本选择与前处理

目前肿瘤分子病理检测常用样本主要包括福尔马林固定石蜡包埋组

织（formalin—fixedparaffin—embedding,FFPE）样本（包括手术切

除和活检组织样本）、细胞学样本和体液样本（包括外周血、脑脊液、浆

膜腔积液上清液、唾液和尿液等）,应依据临床需求、样本可及性及qPCR

检测平台性能选择合适的样本。

（一）样本选择

强烈推荐使用手术切除组织或活检组织FFPE样本。组织样本不可及

时，推荐采用细胞学样本进行检测。若组织和细胞学样本均不可及，推

荐外周血等体液样本进行循环肿瘤DNA（circulatingtumorDNA,

ctDNA）突变检测。

（二）样本前处理

不同类型样本的前处理应根据各自特点建立标准操作程序（standard

operatingprocedure,SOP）,详尽规范样本采集、运输、接收/拒收、

保存和前处理流程，确保样本符合后续检测要求。

1.组织学样本：

标本离体后应在30min内浸泡于10-15倍体积的4%中性甲醛（10%

福尔马林）固定液中，大样本应注意逐层切开以充分固定，根据样本大

小和组织类型适当调整固定时间，一般不超过72ho样本浸蜡和包埋

温度一般在58-60°C,不宜过高。

2.细胞学样本：

包括胸/腹腔积液、心包积液和细针穿刺标本等，强烈推荐将细胞学

样本制备成细胞蜡块，使用4%中性甲醛（10%中性福尔马林）固定液或

者95%乙醇固定，后续操作可参照组织样本处理要求及病理质控。也

可将细胞学样本涂片或液基细胞学制片，镜下评估肿瘤细胞数量及比例,

对于质控合格的细胞学样本，收集细胞沉渣，直接裂解提取核酸。此外，

浆膜腔积液离心后的上清液可作为一种补充检测样本，用于分子病理检

测，但应关注其假阴性风险，必要时可与细胞沉渣的检测结果相互验证。

3.体液样本：

外周血是分子检测最常用的体液样本，主要通过分离血浆中ctDNA

进行分子检测。可使用含有游离DNA保护剂和防细胞裂解剂的专用采

血管，采集不少于1。ml的全血。前处理时，采用先低速后高速的二

次离心法分离血浆。其他体液样本可参考外周血样本采集、保存和前处

理方法。强烈推荐将体液样本与组织样本的前处理和核酸提取等操作分

别在相对独立的物理空间（独立生物安全柜或实验室房间）进行。

（三）样本质量评估

在核酸提取前，应对组织和细胞样本的前处理过程、保存情况及细胞

成分进行评估。对于体液样本，应