细菌染色基本程序董慧讲解.pptx

董慧

细菌染色标本检查法

细菌为无色半透明的微小生物，用光学显微镜直接进行观察通常显示不清。

为了更好的显示细菌的形态、大小、排列、染色和结构组成等特点，常将细菌标本染色后再进行镜检，称为染色标本检查法。

常用染料

根据助色基解离后的带电情况，可将染料分为碱性和酸性两大类。此外还有复合染料和单纯染料。

复染法基本步骤

初染：对已干燥固定的标本初步染色，初步显示细菌的形态特征。

媒染：用媒染剂以增加染料与被染物的亲和力或使细胞膜通透性改变，目的是加强染色效果。常用媒染剂有碳酸、碘液、明矾等。

脱色：用脱色剂使某些已着色的被染物脱去颜色，检查染料结合的稳定性，以显示各种细菌不同染色反应性和结构特点。常用脱色剂是醇类、丙酮等，95%乙醇最常用。

复染：又称对比染色，使已脱色的被染物重新着色。常用稀释复红、沙黄、亚甲蓝等。

复染法

（1）革兰染色法：

（结晶紫）初染→（碘液）媒染→（95%酒精）脱色→（稀释复红）复染

意义：①鉴定细菌（G+、G-）；②指导临床选择药物；③与细菌的致病性有关：G+—外毒素；G-—内毒素。

（2）抗酸染色法：

红色：抗酸性细菌。

蓝色：非抗酸性细菌。

细菌染色的基本程序

如何制作一张好的片？

一、涂片

涂片方式因标本而异

菌膜面积约1cm2，薄而均匀

二、干燥

室温中自然干燥。

加速干燥，将标本离火焰半尺高处略烘。

目的：使水分充分蒸发，为固定做准备。

注意事项：切勿靠近酒精灯防止菌体崩解变形。

三、固定

火焰加热法：玻片有菌膜一面向上，在火焰的外焰钟摆样速度通过三次，时间约3秒钟。

目的：使细菌蛋白凝固，杀死细菌；改变细菌对染料的通透性，利于着色使菌体牢固黏附于玻片上。

思考题

影响细菌形态学检查的因素有哪些？

董慧