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第一章培养基简介
培养基(Culturemedium)是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需要的各种营养物质,由人工配制而成的营养基质,它专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存使用。为了满足微生物生长和代谢的需要,培养基必须包含碳源、氮源、水、无机盐和生长因子五大类营养物质。一般基础培养基中含有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸膏、氯化钠、琼脂等基本营养成分。一些选择、鉴别培养基根据用途不同,需加入抑菌剂、指示剂、血液、糖等试剂,以利于特定细菌的分离和鉴别。需要使细菌大量生长、繁殖的培养基,主要成分多为氨基酸、核苷酸、无机盐、生长因子等。培养基的研制是微生物学领域的一项重要内容。培养基属于基础应用学科,它广泛的应用于食品、化妆品、医药卫生、工农业、检验检疫、环保等诸多领域。
第一节培养基的成分
琼脂是从石花菜、江篱、紫菜等红藻中提取的一种藻胶,它是由琼脂糖和琼胶质组成的长链多糖化合物。其优点在于不能被细菌分解利用,在细菌培养的温度下凝胶强度稳定。琼脂在细菌培养基中的应用使得细菌培养分离、纯化成为可能,极大地推动了细菌学的发展。
蛋白胨为动物蛋白经酶消化后得到的产物。蛋白胨在培养基中的主要作用是作为细菌生长代谢过程中所需要的氮源。它的营养价值在于其中含有细菌菌体细胞生长所需要的氨基酸、多肽等成分。
胰酪蛋白胨(CaseinTryptone)是一种优质蛋白胨,亦称胰酶消化酪蛋白胨,或称胰蛋白胨。该蛋白胨系酪蛋白经胰酶消化后,浓缩干燥而成的浅黄色粉末,具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。可配制各种微生物培养基,用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定,以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。该蛋白胨营养丰富,为生物基因工程高密度发酵技术提供了可能。
大豆蛋白胨是由大豆蛋白经木瓜蛋白酶水解而得到的产物,营养丰富,富
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含碳水化合物和维生素。常用于培养对营养苛求的细菌。大豆蛋白胨不适合用于配制糖发酵试验培养基,因为其中含有大量的碳水化合物。
示蛋白胨是一种营养价值较高的蛋白胨,含有高比例的低分子量多肽、氨基酸以及促营养元素等。它用在生产细菌毒素以及培养如奈瑟氏菌、葡萄球菌、嗜血杆菌、布鲁氏菌和棒状杆菌等对营养苛求细菌的培养基中。
牛肉浸膏是采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。易溶于水,水溶液呈淡黄色。牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。牛肉浸粉是用瘦牛肉加热抽提的浸出物,经喷雾干燥而形成的粉状物。它富含水溶性动物组织的营养物,如糖类、有机含氮物、水溶性维生素及无机盐等。它们的主要作用是补充蛋白胨以及其它氮源的营养不足。一般的用量为0.3%~0.5%。
酵母粉是酵母细胞的自溶物经浓缩、喷雾干燥而成的粉状物。酵母粉富含B族维生素、有机氮以及碳水化合物等。酵母粉在培养基中的含量一般为0.3%~0.5%。
胆盐是一种胆酸的钠盐,它是从动物的胆汁中提取的一种混合物,含有胆酸、结合胆酸以及胆汁醇等,各种成分及其比例随动物的种属及贮存条件而变化。胆盐用在培养基中作为选择性抑制剂,主要抑制革兰氏阳性菌的生长。
第二节培养基的分类
19世纪末,德国著名细菌学家科赫成功制备了固体培养基,并发明了玻璃培养皿,引起了细菌学的重大变革,同时也极大的推动了细菌的分离和鉴别。从此培养基生产成为了一项重要的产业。出现了世界闻名的英国Oxoid公司、美国BD公司和Neogen公司等专业化培养基生产厂家。我国从20世纪50年代开始研制干燥培养基,到目前已有200多种干燥培养基,涌现出了以北京陆桥为代表的50多家培养基生产厂家。
培养基按营养物质的来源可分为:(1)天然培养基:由化学成分不完全明了的天然物质组成;(2)合成培养基:全部由已知化学成分的物质组成;(3)
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半合成培养基:由不明化学成分的天然物质和已知化学成分的物质组成。
培养基按物理性状可分为:(1)液体培养基:不含凝固剂,利于菌体的快速繁殖、代谢和积累产物;(2)流体培养基:含0.05%~0.07%琼脂粉,可降低空气中氧进入培养基的速度,利于一般厌氧菌的生长繁殖;(3)半固体:含0.2%~0.8%琼脂粉,多用于细菌的动力观察、菌种传代保存及贮运细菌标本材料;(4)固体培养基:含1.5%~2%琼脂,用于细菌的分离、鉴定、菌种保存及细菌疫苗制备等多方面。
培养基按功能可分为:(1)运输培养基:在取样后和实验室样品处理前的时间保护和维持微生物活性的培养基。运输培养基中通常不允许包含使微生物的增殖的物质,但是培养基应能保护菌种,确保他们不质变(如:Stuar
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