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英雄者，胸怀大志，腹有良策，有包藏宇宙之机，吞吐天地之志者也。——《三国演义》
微生物学实验——细菌总DNA提取、凝胶电泳检测
实验名称：细菌总DNA提取、凝胶电泳检测
姓名：
学号：
系别：
实验日期：
同组同学名单：
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英雄者，胸怀大志，腹有良策，有包藏宇宙之机，吞吐天地之志者也。——《三国演义》
微生物学实验——细菌总DNA提取、凝胶电泳检测
摘要：本试验通过提取细菌总DNA，并进行凝胶电泳检测，使我们学习到了细菌
总DNA提取的原理和方法以及琼脂糖凝胶电泳方法
实验目的：
1.学习细菌总DNA提取的原理和方法
2.学习琼脂糖凝胶电泳方法
实验材料：
1.菌种：E.coli
2.试剂：TE、溶菌酶溶液（20mg/ml）、10%SDS、蛋白酶K（20mg/ml）、5mol/L
NaCl、酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)、乙醇
3.仪器：高速台式离心机、紫外检测仪
4.其他材料：离心管、无菌吸头、移液器等
实验方法及步骤：
1.取1.2ml细菌培养液，6000r/min离心2min，去上清。
2.加1.5ml溶菌酶溶液，做成悬液。
3.37℃水浴20min
4.加入0.6ml10%SDS（0.1mol/lNacl，0.5mol/lTris，10%SDS，pH=8）反复
颠倒混匀10min，10000r/min离心10min，取上清（分两管，每管各0.6ml）
5.用等体积苯酚：氯仿：异戊醇各抽提1次，混合均匀（颠倒50次），10000r/min
离心10min，吸上清0.4ml。
6.加入10μl的3mol/l乙酸钠和0.8ml无水乙醇，-20℃沉淀DNA10min，
12000r/min离心10min，去上清。
7.加入70%乙醇2ml，转动离心管，倒去液体，待乙醇挥发后（20min），用30μl
TE溶解
8.用移液器吸取总DNA4μl于封口膜上，再加入1μl的6X载样缓冲液，混
匀后，小心加入点样孔
9.打开电源开关，调节电压至3-5V/cm，可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动，
电泳约30min-60min
10.电泳结束后取出凝胶，置EB溶液中染色5~10min，清水漂洗
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英雄者，胸怀大志，腹有良策，有包藏宇宙之机，吞吐天地之志者也。——《三国演义》
微生物学实验——细菌总DNA提取、凝胶电泳检测
11.将染色后的凝胶置于紫外透射检测仪上，盖上防护观察罩，打开紫外灯，可
见到发出荧光的DNA条带
实验结果：
下图中标记“四1”的为我们所提取DNA条带，可见一条清晰条带，呈现一
条迁移率很小的整齐条带。前端有大量DNA分子，稍亮。
实验结果分析：
本实验提取到的总DNA通过电泳分析证明DNA含量水平合适，可以用于PCR
实验。琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形
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