盐胁迫下花生CBL基因家族鉴定及表达模式分析.docxVIP

盐胁迫下花生CBL基因家族鉴定及表达模式分析

目录

一、内容描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2

二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2

（一）花生样本的采集与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

（二）盐胁迫实验设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

（三）基因鉴定方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

（四）基因表达模式分析方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

三、花生CBL基因家族的鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

（一）花生基因组数据库检索．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

（二）基因序列的特征分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

（三）基因家族的划分与确认．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

四、盐胁迫下花生CBL基因表达模式分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

（一）RNA提取与反转录．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

（二）实时荧光定量PCR分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

（三）基因表达量的统计与比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

五、结果与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

（一）花生CBL基因家族的鉴定结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

（二）盐胁迫对花生CBL基因的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

（三）花生CBL基因在盐胁迫下的表达模式分析．．．．．．．．．．．．．．．．．18

（四）与其他植物的比较分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

六、结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

（一）本研究的主要结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

（二）研究的不足之处与限制因素．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

（三）对未来研究的展望与建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

一、内容描述

本章节主要针对盐胁迫下花生CBL基因家族进行鉴定及表达模式分析。首先，通过生物信息学方法，对花生基因组数据库进行检索，筛选出潜在的CBL基因家族成员。接着，对CBL基因家族成员进行序列比对、系统发育分析、基因结构分析等，明确其进化关系和基因结构特征。随后，利用实时荧光定量PCR技术，检测盐胁迫下花生CBL基因家族成员的表达模式，分析其在盐胁迫响应过程中的表达变化。结合已有文献报道，探讨CBL基因家族在花生抗盐性中的作用及其调控机制，为花生抗盐育种提供理论依据。本章节的研究成果有助于深入了解花生CBL基因家族的功能，为花生抗逆性研究提供新的思路。

二、材料与方法

实验材料

本研究采用的花生品种为南农大一号，其种子购自中国农业科学院作物研究所。实验所用盐胁迫处理的土壤样品取自江苏省盐城市某农田，土壤类型为黄棕壤。实验中所用的盐胁迫浓度分别为0mM,5mM,10mM,15mM和20mM。实验过程中使用的其他试剂均为分析纯，包括Trizol总RNA提取试剂盒、反转录酶、dNTP、限制性内切酶、T4DNA连接酶等。

实验方法

RNA提取：将采集的土壤样品在低温下研磨成细粉，然后加入Trizol提取总RNA。具体操作步骤按照Trizol说明书进行。

mRNA分离：将提取的总RNA用DNaseI处理去除DNA污染，然后通过酚-氯仿法和异丙醇法分别对mRNA进行分级和纯化。

cDNA合成：利用反转录酶将mRNA逆转录为cDNA。反转录反应体系如下：2μlRNA模板，1μldNTP混合物，1μl5×RTbuffer，1μlRNaseinhibitor，1μlM-MLV逆转录酶，加无菌水至50μl。

PCR扩增：以cDNA为模板，设计特异性引物进行CBL基因家族鉴定。引物序列见表1。PCR反应体系和条件如下：2μlcDNA模板，1μl10×PCRbuffer，1μldNTP混合物，1μlMgCl2，1μl上游引物和下游