临床微生物检验技术精品资源共享协和医院检验科陈建森讲解.ppt

霍乱弧菌是烈性传染病，凡在流行季节和地区有腹泻症状的患者均应快速准确地作出病原学诊断．可取”米泔水”样便，或采取呕吐物或其它标本．采取的标本最好就地接种碱性胨水增菌．不能及时接种者可用棉拭子挑取标本或将肛门拭子直接插入卡－布运送培养基中．送检标本应密封，专人运送．*多数EIEC动力-，乳糖不发酵或迟缓发酵．EHEC:O157:H7不发酵(或迟缓)山梨醇．可用SMAC直接筛选不发酵山梨醇的菌落．**临床标本微生物学检验（四）

粪便标本的微生物学检验临床微生物检验技术精品资源共享课程协和医院检验科陈建森学习目标１熟悉粪便标本中常见的病原体２熟悉粪便标本采集３掌握粪便标本的微生物学检验胃肠道正常菌群粪便标本中常见的病原体粪便标本中常见的病原体(续)肠毒素为主的病原菌侵袭性为主的病原菌病毒霍乱弧菌、志贺菌（福氏、宋内）、大肠埃希菌（ETEC、EHEC、EAEC）、金黄色葡萄球菌、难难梭菌、产气荚膜梭菌沙门菌、大肠埃希菌（EPEC、EIEC）、志贺菌（鲍氏、志贺）、弯曲菌、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、结核分枝杆菌、白假丝酵母菌轮状病毒、埃可病毒、Norwolk病毒、甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、腺病毒学习目标１熟悉粪便标本中常见的病原体２熟悉粪便标本采集３掌握粪便标本的微生物学检验2、标本采集与运送自然排便法：用药前自然排便，采集脓血、黏液部分2～3g，外观无异常的粪便应从粪便的表面不同部位取材，液体便取絮状物1～2ml,置无菌容器内送检。直肠拭子法：如排便困难或婴幼儿患者，可用此法采集标本。对住院的腹泻成人患者，应采集住院3日内粪便标本送检。标本采集后应尽快送检，如不能立即送检，提倡使用Cary-Blair运送培养基或pH7.0PBS甘油缓冲液运送和保存。检验方法--涂片镜检：霍乱弧菌检查染色镜检动力试验制动试验酵母菌检查检验方法--涂片镜检：粪便优势菌检查粪便涂片查菌群报告单内容描述正常参考值细菌总数约300500-5000/油镜革兰阳性杆：革兰阴性杆：革兰阳性球：革兰阴性球：10：40：45：5革兰阳性杆：50.2-74%革兰阴性杆：35.29-44%革兰阳性球：2-10%革兰阴性球：0.5-5%优势菌革兰阳性球菌及酵母样菌革兰阳性杆菌其他（特征菌变化酵母样菌明显增多印象诊断：Ⅲ度肠道菌群失调改变细菌学检验-分离培养与鉴定沙门菌及志贺菌培养霍乱弧菌培养副溶血弧菌培养致病性大肠埃细菌培养金黄色葡萄球菌培养小肠结肠炎耶尔森菌培养空肠弯曲菌培养艰难梭菌培养真菌培养粪便标本细菌学检验方法和操作流程1、沙门菌及志贺菌分离培养与鉴定直接划线接种于肠道选择性培养基；用接种针挑选不发酵乳糖菌落，分别接种于三糖铁琼脂（KIA)和尿素-动力-靛基质培养基；生化反应，A-F多价“O”血清或因子血清进行鉴定。沙门菌培养与鉴定沙门菌分离培养与鉴定沙门菌血清凝集试验多价O抗血清(A-F)；O抗血清；H因子血清；注意事项：与多价抗血清不凝集时，可在玻璃试管内用NS将细菌制成浓菌液，放入沸水中加热15-30分钟，以破坏菌体表面Vｉ抗原，冷却后再做凝集试验。如仅出现单相H，需用位相分离方法诱导出另一相抗原后再进行检查。志贺菌分离培养与鉴定志贺菌分离培养与鉴定初步鉴定：可疑菌落：EMB无色或不透明的琥珀色；MAC上无色不透明；SS上不透明或透明；XLD上呈红色。基本生化反应：TSIA：产酸／产气，枸橼酸盐-，脲酶-，动力-，VP-最终鉴定：全面生化反应血清学试验志贺菌分离培养与鉴定定群：４种多价血清做玻片凝集试验；定型：分型：3、霍乱弧菌分离培养与鉴定霍乱弧菌是烈性传染病，凡在流行季节和地区有腹泻症状的患者均应快速准确地作出病原学诊断。可取”米泔水”样便，或采取呕吐物或其它标本进行检查；采取的标本最好就地接种碱性胨水增菌；不能及时接种者可用棉拭子挑取标本或将肛门拭子直接插入卡－布运送培养基中；送检标本应密封，专人运送。3、霍乱弧菌分离培养与鉴定霍乱弧菌分离培养与鉴定涂片染色镜检：动力和制动试验：荧光抗体染色：霍乱毒素(CT)测定：改良ELISA：以GM1包被，捕获标本中的CT．乳胶凝集法测定CTPCR法分离、培养与鉴定碱性胨水增菌转种TCBS平板＼４号琼脂平板或庆大霉素琼脂平板初步鉴定：TCBS平板－黄色菌落４号琼脂平板或庆大霉素琼脂平板－灰褐色菌落O1群和O139群多价和单价血清凝集试验最后鉴定：全面生化试