临床微生物检验技术精品资源共享附一医院检验科杨滨93讲解.ppt

临床标本微生物学检验（二）

脑脊液标本的微生物学检验临床微生物检验技术精品资源共享课程附一医院检验科杨滨学习目标１熟悉脑脊液标本中常见的病原体２熟悉脑脊液标本采集３掌握脑脊液标本的微生物学检验脑脊液标本的检验正常人的脑脊液是无菌的。一旦感染，病情危急。一、脑脊液中常见病原体临床上最常见的1．细菌性脑膜炎以结核性脑膜炎最为常见，肺炎球菌脑膜炎、流感嗜血杆菌脑膜炎及其他革兰阴性杆菌脑膜炎均可发生。2．真菌性脑膜炎最常见隐球性脑膜炎。3．病毒性脑膜炎乙脑病毒、肠道病毒。脑脊液标本的检验脑脊液标本的检验二、标本采集1.标本采集多由临床医生采集，以70%酒精或2%碘酊消毒背部下方，并麻醉之；然后以一特制通管针，轻轻的由第三与第四腰椎间的中线部位穿刺入脊髓蛛网膜采集约3～5ml脑脊液于3支无菌试管中，每支试管至少1～2ml；然后马上将第2支（或第1支）送至实验室。做脑脊液培养时，建议同时做血培养。腰穿时必须作彻底消毒和无菌操作。2.标本的运送常温立即送检，实验室收到标本后应立即接种。脑脊液标本送检的理想时间为15分钟内，半小时送检是可接受的，如果送检时间超过1小时，则会影响结果，在结果报告时，在备注处注明此情况。如不能及时送检，可使用血培养瓶（怀疑脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染时，请勿使用血培养瓶）脑脊液标本的检验（一）检验程序脑脊液标本的检验三、细菌学检验（一）检验程序三、细菌学检验脑脊液标本的检验操作流程脑脊液标本的检验（二）检验方法（1）一般细菌涂片镜检：取沉淀物涂片，革兰染色镜检，可初步报告。1.涂片镜检混浊或脓性脑脊液可直接涂片，染色镜检。无色透明的脑脊液应以3000r/m离心10～15分钟，根据检验目的的不同采取不同的染色方法镜检。脑脊液标本的检验（二）检验方法（2）结核分枝杆菌检查：脑脊液表面如形成纤维网，疑为结核分枝杆菌，以4000r/min离心30分钟，取沉淀物做涂片，抗酸染色镜检，可初步报告。脑脊液标本的检验（二）检验方法（3）新型隐球菌检查：取沉淀物涂片，墨汁染色镜检，可初步报告。2.分离培养与鉴定脑脊液标本的检验（1）一般细菌培养：取标本分区划线接种于血平板和巧克力平板上，置35℃CO2培养18～24h。根据菌落特征和形态染色，进一步做生化试验及血清学试验进行鉴定，同时做AST。（2）结核分枝杆菌培养：疑结核分枝杆菌感染时，取脑脊液接种于罗-琴或米氏7H-10培养基，斜置于35℃培养7天后直立，继续孵育至1个月，有细菌生长时，对菌落进行鉴定。脑脊液标本的检验（3）真菌培养：疑真菌感染时，用血平板或沙保弱培养基分离培养，分别置22℃及35℃培养，有菌落生长进行进一步的鉴定。3.结果报告一旦发现病原体，立即报告临床医生。增菌培养过程中有菌生长，应及时进行涂片、革兰染色、镜检，及时报告细菌种类（一级报告）。如有细菌生长，增菌液直接进行药物敏感试验，争取短时间报告（二级报告）。建立危急值报告制度，按照危急值报告程序报告和登记制度进行登记。